乙型肝炎病毒相關性肝纖維化組織的比較蛋白質組學研究.pdf

1、目的：采用差異熒光雙向凝膠電泳(DIGE)技術及質譜技術篩選并鑒定乙型肝炎病毒(HBV)相關肝纖維化組織差異表達蛋白質，以期獲得肝纖維化早期診斷的分子標志物以及潛在的藥物靶標，并為肝纖維化的病理發(fā)生機制研究提供思路。 方法：采用DIGE技術篩選Cy3、Cy5及Cy2熒光素標記的肝纖維化及正常肝組織差異表達蛋白質，并用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)或串聯(lián)質譜技術進行鑒定并分析，對部分有潛在價值的差異表

2、達蛋白質采用免疫組織化學技術從蛋白質水平進行驗證。 結果：共篩選出26個差異表達蛋白質點，其中在肝纖維化組織中15個蛋白質點上調，11個蛋白質點下調；上述26個蛋白差異點采用質譜技術成功鑒定出19種蛋白質。根據(jù)蛋白質功能的不同，這些差異蛋白質主要參與氧化應激、分子伴侶、細胞骨架、能量代謝及信號傳導等過程；細胞角蛋白8、高遷移組蛋白B1、熱休克蛋白70等在HBV相關肝纖維化組織中高表達；硫氧還蛋白過氧化物酶、三磷酸腺苷合成酶、神經(jīng)

3、多肽h3等在HBV相關肝纖維化組織中低表達。免疫組化驗證結果表明肝纖維化組織熱休克蛋白70、細胞角蛋白8、高遷移組蛋白B1表達水平均高于正常肝組織，且表達水平隨纖維化程度進展而上調，與蛋白質組分析的結果基本一致。 結論：蛋白質組學技術是篩選HBV相關肝纖維化組織差異表達蛋白質有效方法。發(fā)現(xiàn)和鑒定出相關的蛋白質，可能成為潛在藥物靶標以及早期診斷、治療的分子標志物，同時也為HBV相關肝纖維化的病理機制研究提供了一個新的研究方法系統(tǒng)。