廣西虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒素成分分析及對(duì)人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的作用機(jī)理研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)廣西虎紋捕鳥(niǎo)蛛毒成分進(jìn)行氨基酸測(cè)定，以及紅外、紫外光譜法定性分析，初步鑒定蛛毒的化學(xué)成分；并對(duì)其藥理作用作體外實(shí)驗(yàn)，研究毒素對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡的影響，以及對(duì)細(xì)胞中Caspase-3和Bcl-2/Bax的表達(dá)影響。
　　方法：1化學(xué)成分的初步定性分析采用氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)蛛毒的多種氨基酸成分進(jìn)行定性及定量的研究，并且輔以紫外、紅外光譜法進(jìn)行定性研究，初步鑒定蛛毒的化學(xué)成分。2抗腫瘤活性的研究采用MTT法、流式分析法、C

2、aspase-3活性測(cè)定法測(cè)定HWZD對(duì)U251人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖作用的影響。3 HWZD對(duì) U251人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響采用RT-PCR技術(shù)測(cè)定HWZD對(duì)U251人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞抑癌基因bax，癌基因bcl-2表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1采用氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)蛛毒的多種氨基酸成分進(jìn)行定性及定量的研究，結(jié)果表明該鑒別方法操作簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)，可用于蛛毒的定性鑒別和含量測(cè)定；利用紫外-可見(jiàn)光譜、紅外光譜法對(duì)蛛毒樣品進(jìn)行光

3、譜鑒別研究，顯示蛛毒具有一定的光譜特征。2 MTT法表明HWZD對(duì)U251細(xì)胞均有顯著抑制作用(P＜0.05或P＜0.01)，具有劑量依賴性。HWZD劑量為37.5、50、75、100、150mg/L時(shí)，對(duì)U251細(xì)胞的增殖有顯著性抑制作用(P＜0.05或P＜0.01)，IC50為53.48 mg/L。流式細(xì)胞儀分析法表明HWZD對(duì)U251細(xì)胞具有顯著性凋亡作用，并有濃度依賴和時(shí)效關(guān)系。在劑量為150 mg/L，并誘導(dǎo)48h，細(xì)胞早期凋

4、亡率84.1％，晚期凋亡率4.48%。Caspase-3活性測(cè)定表明HWZD在150 mg/L時(shí)對(duì)細(xì)胞中的執(zhí)行分子Caspase-3的激活速度快，活化程度為9.23并存在劑量依賴關(guān)系。3 HWZD在濃度為50、75、100 mg/L時(shí)均顯著增強(qiáng)基因bax的表達(dá)水平(P＜0.05或P＜0.01)。HWZD在濃度為50、75、100mg/L時(shí)均顯著降低癌基因bcl-2的表達(dá)水平(P＜0.05或P＜0.01)。
　　結(jié)論：1初步建立了H