端粒在As-,2-O-,3-誘導(dǎo)L02及HepG2細(xì)胞凋亡及增殖中的作用.pdf

1、目的：探索端粒、端粒結(jié)合蛋白、端粒酶活性及端粒逆轉(zhuǎn)錄酶基因表達(dá)在As2O3誘導(dǎo)L02和HepG2細(xì)胞凋亡的作用。 方法：體外培養(yǎng)細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)觀察12μmol/ L As2O3對(duì)L02和HepG2細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用，應(yīng)用以PCR為基礎(chǔ)的端粒重復(fù)序列擴(kuò)增（TRAP-PCR）銀染法檢測(cè)端粒酶活性；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)mRNA表達(dá)；0.625μmol/LAs2O3處理L02和HepG2細(xì)胞

2、2w、4w、6w，染色體核型分析檢測(cè)細(xì)胞染色體畸變；檢測(cè)端粒逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)mRNA和端粒酶活性表達(dá)。Western-blot檢測(cè)As2O3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及增殖過程中端粒結(jié)合蛋白、核增殖抗原（PCNA）蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果：流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，12μmol/L As2O3處理L02細(xì)胞24、48、72h，凋亡率分別為5.81％±1.00、8.65％±2.05、13.15％±1.06（P<0.05）；處理HepG2細(xì)胞24、4

3、8、72h后，凋亡率分別為9.74％±1.22、21.89％±2.14、42.72％±0.83，均顯著高于對(duì)照組0.98％±0.11（P<0.05）；RT-PCR分析端粒逆轉(zhuǎn)錄酶基因（hTERT mRNA）表達(dá)，結(jié)果顯示12μmol/L As2O3處理L02和HepG2細(xì)胞72h，L02細(xì)胞hTERT mRNA 的表達(dá)消失，HepG2細(xì)胞hTERT mRNA表達(dá)較對(duì)照組明顯下降（P<0.05）。以PCR為基礎(chǔ)的端粒重復(fù)序列擴(kuò)增（TRAP

4、-PCR）銀染法檢測(cè)端粒酶活性表達(dá)，結(jié)果顯示12μmol/L As2O3處理L02細(xì)胞24h、48h端粒酶活性開始下降，72h無(wú)明顯端粒酶活性（P<0.05）；處理HepG2細(xì)胞24h、48h端粒酶活性無(wú)明顯改變，72h端粒酶活性明顯受到抑制（P<0.05）。Western-blot分析端粒結(jié)合蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示12μmol/L As2O3處理L02和HepG2細(xì)胞72h端粒結(jié)合蛋白TRF1、TRF2表達(dá)較對(duì)照組上調(diào)（P<0.05）。0

5、.625μmol/LAs2O3處理L02和HepG2細(xì)胞6w，染色體端-端融合及雙微體的畸變率較對(duì)照組增加，差異有顯著性（P<0.05）；hTERT mRNA及端粒酶活性的表達(dá)較對(duì)照組增加（P<0.05）。Western-blot分析端粒結(jié)合蛋白及核增殖抗原表達(dá)，結(jié)果顯示0.625μmol/L As2O3處理L02和HepG2細(xì)胞6w，端粒結(jié)合蛋白TRF1、TRF2表達(dá)較對(duì)照組下調(diào)（P<0.05），核增殖抗原（PCNA）表達(dá)較對(duì)照組上調(diào)