16594.菠菜及葎草性別相關srap分子標記的克隆與鑒定

1、Ⅲ，C口LFOTN^ITNEG。AsNRDAPIDME。NLETIFcIuCALTARIONMAORKEFRsExRELATEDsRAPM。芝崔：三孟羞五INSPINACIAOLERACEAL～、”1～～ADissertationSubmin。dtotheGraduatesch。。l。flienann。rrn“u“i”cr5Ityin眥ialFulfillment。ftheRequirementsformeDegreeofMastero

2、fScien。eByRenYingXueSupervis。r：Ass。ProfJ9e昭∞”4”fj4愕May2012摘要菠菜(Spm刪of：eraceaL)為藜科(Chenopodiaceae)菠菜屬一年‘L或兩年生草本植物，雌雄異株，是一種大面積種植的重要經(jīng)濟作物。菠菜的染色體組成為2n=2x=12，其具有生長周期短、易種植、表型豐富、花原基異型不表達等特點，因此，其為研究雌雄異株植物性別分化分子機制的一種理想材料。截止到目時，國內外

3、學者雖然從細胞學、形卷學、生理生化、分子生物學等方面對菠菜的性別分化進行了研究，但是菠菜性染色體仍然缺乏細胞學證據(jù)，同時未有性別決定基因克隆的報道。萑草(Humul淞scandensL)為?？?Moraeeae)捧草屬，是一種常見的雌雄異株雜草。薄草雌株的染色體組成為2n16，具有XX兩條性染色體，雄株為2n=17，具有XYIY2三個較大的性染色體，其同樣為研究雌雄異株植物性別分化分子機制的理想材料。然而與酸模(Rumexacetosa

4、)相比而言，關于捧草的性別決定的分子機制的研究仍然處在非常初級的階段。鑒于此，本研究以菠菜和蓓草為研究材料，利用SRAP(SequenceRelatedAmplifiedPoiymorphism)分子標已技術對其雌、雄基因池進行性別相關特異片段的篩選，篩選出吲生別相關的分子標記，借助染色體熒光原位雜交及斑點雜交技術對特異片段進行了驗證，主要研究結果如下：(1)利用相關序列擴增多忐|生(SRAp)技術對菠菜雌、雄基因池進行性別相關特異片段

5、的篩選。借助聚丙烯酰胺凝膠電泳對擴增產(chǎn)物進行了分析，從256對引物組合中篩選出了20對可以穩(wěn)定擴增出特異條帶的引物組合，引物多態(tài)性為7813％。將這20對引物的擴增產(chǎn)物用8％的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，共擴增出了382條帶，多態(tài)性條帶為76條，多忐率為199％。選取多態(tài)性較好的引物組合進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，并對雄性特異片段進行克隆測序。在獲得的序列中，有一個391bp的雄性特異片段與18srRNA部分片段同源性較高(同源性高達99