幼葉黃化油菜Cr3529抑制消減文庫的構(gòu)建和Toc33基因cDNA的克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、應(yīng)用抑制性消減雜交(suppression subtractive hybridization,SSH)技術(shù)來研究黃化突變體差異表達(dá)的基因,成功構(gòu)建了甘藍(lán)型油菜幼葉黃化突變體Cr3529和野生型3529的正、反向消減文庫.通過菌落PCR和斑點(diǎn)雜交,對正向消減文庫進(jìn)行差異篩選,共篩選到125個(gè)野生型3529差異表達(dá)的cDNA片段,其大小在100bp到1000 bp之間.隨機(jī)挑取38個(gè)陽性克隆測序,測序結(jié)果與GenBank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析比較

2、,發(fā)現(xiàn)除兩個(gè)序列外,其它均為非重復(fù)出現(xiàn)的序列,其中四個(gè)克隆可能為新的基因序列,其余的克隆涉及到蛋白質(zhì)代謝、糖代謝、光合作用、能量代謝、脅迫反應(yīng)以及激素作用等多個(gè)代謝途徑,這些基因片段在抑制性消減雜交前后的表達(dá)量有較大變化,即消減后被大大富集了.為了探究黃化性狀的突變機(jī)理,提取甘藍(lán)型油菜黃化突變體Cr3529的總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,PCR擴(kuò)增并克隆得到與擬南芥葉綠體外膜轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)器構(gòu)件蛋白基因Toc33同源的cDNA編碼區(qū)序列,命名為

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