蓖麻成熟期胚抑制消減cDNA文庫(kù)構(gòu)建及其差異表達(dá)基因分析.pdf

1、蓖麻(Ricinus communis L.)是當(dāng)今世界上重要的特種油料作物,廣泛分布于世界各地。目前,在蓖麻脂肪酸代謝機(jī)理方面很少有研究,特別是從蓖麻胚發(fā)育的角度研究脂肪酸合成代謝網(wǎng)絡(luò)的報(bào)道更少。如何從這一復(fù)雜的生化體系中找到關(guān)鍵的調(diào)控基因,闡明其生物學(xué)功能并朝著符合人類需求的方向進(jìn)行改造,對(duì)改良蓖麻脂肪酸組成提高其油脂含量具有重要意義。我國(guó)是蓖麻的原產(chǎn)地,“油蓖5號(hào)”是我國(guó)特有的蓖麻品種,本課題以“油蓖5號(hào)”蓖麻為試材,利用抑制性消

2、減雜交技術(shù),比較蓖麻不同組織以及胚不同發(fā)育時(shí)期的基因表達(dá)差異,有利于篩選出與胚發(fā)育相關(guān)且調(diào)控油脂代謝的關(guān)鍵基因,為后期研究奠定一定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 利用抑制性消減雜交技術(shù),以“油蓖5號(hào)”15 DAF胚為Driver,35 DAF胚為Tester構(gòu)建了35 DAF胚抑制消減cDNA文庫(kù),抑制消減cDNA文庫(kù)消減效率在210以上。隨機(jī)挑取700個(gè)克隆進(jìn)行菌液PCR.檢測(cè)篩選獲得596個(gè)陽(yáng)性克隆,有效重組率在85％以上,文庫(kù)

3、的插入片段平均長(zhǎng)度約500 bp。又經(jīng)過(guò)點(diǎn)雜交篩選后選擇了521個(gè)陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序,經(jīng)過(guò)同源性比對(duì)歸并后得到96個(gè)差異表達(dá)基因,其中包括31個(gè)未知基因和65個(gè)已知基因,這些基因涉及油脂合成、糖的分解、蛋白質(zhì)貯藏與降解等多個(gè)方面。
　　 通過(guò)對(duì)其中蓖麻油體蛋白、蓖麻貯藏蛋白、擬南芥類水解腈蛋白等5個(gè)基因進(jìn)行蓖麻不同組織表達(dá)情況的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)其在胚中的表達(dá)量很高。為檢測(cè)這幾個(gè)基因在胚不同發(fā)育階段的表達(dá)情況,用同樣的方法分析了它們的時(shí)序