水產(chǎn)品中喹諾酮類(lèi)藥物殘留的UPLC-MS-MS分析方法及恩諾沙星藥物代謝研究.pdf

1、喹諾酮類(lèi)藥物是發(fā)展迅速且應(yīng)用廣泛的廣譜抗菌藥物。此類(lèi)藥物的組織藥物濃度高，且分布廣泛，故成為水產(chǎn)養(yǎng)殖中重要的抗感染藥物之一。長(zhǎng)期以來(lái)，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中使用的喹諾酮類(lèi)藥物品種混亂，且出現(xiàn)反復(fù)、超量使用的情況。而該類(lèi)藥物的殘留可對(duì)人、畜、魚(yú)產(chǎn)生副作用，具有致畸、致癌作用。因此，制定一套快速、有效的水產(chǎn)品中喹諾酮藥物殘留檢測(cè)方法，研究該類(lèi)藥物中普遍使用的藥物——恩諾沙星，在鯽魚(yú)不同健康狀況下的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)，同時(shí)研究恩諾沙星對(duì)鯽魚(yú)肝臟脂肪酸組成

2、的影響，對(duì)監(jiān)控水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中該類(lèi)藥物的安全使用意義重大。
　　 本研究分為三個(gè)部分，第一部分為利用UPLC-MS/MS技術(shù)建立一種同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中20種喹諾酮類(lèi)藥物殘留的分析方法；第二部分研究健康和非健康鯽魚(yú)口灌恩諾沙星后的藥代動(dòng)力學(xué)變化，分析不同健康狀況下該藥物在血液和肝臟中的吸收、分布和代謝的差異。第三部分為以口灌恩諾沙星的鯽魚(yú)肝臟作為研究對(duì)象，從脂肪酸組成的變化角度來(lái)研究恩諾沙星對(duì)鯽魚(yú)肝臟可能產(chǎn)生的不良影響。
　　

3、本研究的第一部分利用UPLC-MS/MS技術(shù)建立一種同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中喹諾酮類(lèi)藥物殘留的分析方法。對(duì)樣品前處理（提取液、提取方式和凈化方法）及分離條件進(jìn)行優(yōu)化，樣品經(jīng)檸檬酸磷酸鹽緩沖液(Mcllvaine)超聲提取，采用固相萃取(SPE)方法凈化提取液，并對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行富集，建立了同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)品中20種喹諾酮類(lèi)藥物的UPLC-MS/MS分析方法。該方法對(duì)色譜柱、流動(dòng)相體系、色譜和質(zhì)譜相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了選擇優(yōu)化。結(jié)果表明：依諾沙星、奧索利酸、培

4、氟沙星、帕珠沙星、氟羅沙星含量在3～300μg/kg范圍，萘啶酸、氟甲喹含量在0.5～50μg/kg范圍，其余13種喹諾酮類(lèi)化合物含量在1～100μg/kg范圍內(nèi)均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.9981～0.9999，定量限(LOQ)0.34～8.13μg/kg。藥物含量在5～150μg/kg范圍，除氟甲喹、萘啶酸外，其它喹諾酮的回收率均在63.6％～92.8％之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.51％～11.32％。該方法靈敏度高，定性定量準(zhǔn)確，

5、分析速度快，可滿足水產(chǎn)品中喹諾酮類(lèi)藥物多殘留檢測(cè)的要求。
　　 第二部分對(duì)口灌恩諾沙星后的健康和非健康鯽魚(yú)的比較藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行研究，全面比較了不同健康狀況下恩諾沙星在血液和肝臟中的吸收、分布和代謝的差異。結(jié)果表明：本研究條件下，口灌給藥后恩諾沙星在健康和非健康鯽魚(yú)血液中均符合一級(jí)吸收二室模型。健康組分布半衰期(t1/2ka=0.42h)高于非健康組(t1/2ka=1.11h)，而消除半衰期(t1/2β=7.18h)低于非健康組(

6、t1/2β=18.93h)，曲線下面積(AUC=22.85μg/mL·h)高于非健康組(AUC=18.21μg/mL·h)，平均殘留時(shí)間(MRT=10.53h)低于非健康組(MRT=20.89h)?？诠嘟o藥后恩諾沙星在兩組鯽魚(yú)肝臟中也均符合一級(jí)吸收二室模型，其中健康組和非健康組的吸收半衰期(t1/2ka)分別為0.47h和1.27h，消除半衰期(t1/2β)分別為23.71h和25.66h，總曲線下面積(AUC)分別為85.77μg/m

7、L·h和26.13μg/mL·h；平均殘留時(shí)間(MRT)則分別為10.53h和20.88h。通過(guò)藥代動(dòng)力學(xué)研究，與健康組鯽魚(yú)比較，非健康組鯽魚(yú)的吸收、分布和消除都因?yàn)樵馐懿【趾Χ艿接绊懀_(dá)到峰值后1～1.5h恩諾沙星在非健康鯽魚(yú)的血液和肝臟濃度的降幅分別為67.16％和52.31％，表現(xiàn)出“首過(guò)效應(yīng)”。比照恩諾沙星的最高殘留限量規(guī)定，對(duì)微發(fā)病或已發(fā)病魚(yú)體使用恩諾沙星進(jìn)行治療則需要10d以上的休藥期。
　　 第三部分以口灌恩諾

8、沙星的鯽魚(yú)肝臟作為研究對(duì)象，從脂肪酸組成的變化角度來(lái)研究恩諾沙星對(duì)鯽魚(yú)肝臟可能存在的不良影響。本研究提取口灌恩諾沙星后的鯽魚(yú)肝臟的總脂質(zhì)，采用薄層色譜對(duì)總脂質(zhì)進(jìn)行制備分離，利用氣相色譜分析各組分的脂肪酸組成的變化。結(jié)果表明：口灌藥物后，肝臟脂肪酸中的飽和脂肪酸含量水平增加明顯，多不飽和脂肪酸含量水平下降，根據(jù)臨床研究的飽和脂肪酸含量上升可導(dǎo)致胰島素敏感性降低的報(bào)道，預(yù)示恩諾沙星有抑制胰島素敏感性的可能性。總脂質(zhì)脂肪酸組成中的C20:4-