氟喹諾酮類(lèi)藥物的篩選及達(dá)氟沙星間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf

1、氟喹諾酮類(lèi)(F1uoroquinolones，F(xiàn)QNs)藥物是一種人工合成的新型抗菌藥物，隨著廣泛用于動(dòng)物和人類(lèi)的多種感染性疾病的治療[1～2]，其殘留問(wèn)題已引起了人們的高度重視。目前，檢測(cè)FQNs藥物殘留常用的方法有HPLC<'[3～5]>、ELISA等，其中EIJSA法操作簡(jiǎn)便，靈敏度又高，適用于大量快速檢出殘留藥物。本研究旨在建立這種間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA殘留檢測(cè)的方法。 本實(shí)驗(yàn)首先是把常用的恩諾沙星(ENRO)、諾氟沙星(N

2、FLX)、達(dá)氟沙星(DFLX)3種FQNs類(lèi)藥物，用N-羥基琥珀酰亞胺法與牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)成各自的完全抗原，并且進(jìn)行紫外掃描光譜等鑒定。通過(guò)免疫新西蘭白兔制備出了各自的抗血清。然后采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA分別與其它幾種常用的FQNs類(lèi)藥物(恩諾沙星、沙拉沙星、諾氟沙星、達(dá)氟沙星、環(huán)丙沙星、洛美沙星、氧氟沙星、培氟沙星)做競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。通過(guò)計(jì)算交叉反應(yīng)率，成功的篩選出了達(dá)氟沙星(DFLX)能同時(shí)與本身及恩諾沙星(

3、ENRO)、沙拉沙星(SALX)、諾氟沙星(NFLX)、洛美沙星(LMLX)、氧氟沙星(OFLX)5種FQNs類(lèi)藥物同時(shí)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，且交叉反應(yīng)率較高。 優(yōu)化EIJSA條件后，理想的包被抗原濃度為1.25μg/L，多抗(DFLX-PcAb)的工作濃度為1∶10000,酶標(biāo)二抗的工作濃度為1∶4000。并且得到回歸方程(y=0.7975．0.125xR<'2>=0.989)、標(biāo)準(zhǔn)曲線和最適檢測(cè)范圍(0.1～10ng/L)。通過(guò)評(píng)價(jià)