豬CACNA1S基因的研究.pdf

1、鈣離子通道是由多個(gè)亞單位組成的多基因家族復(fù)合體，參與機(jī)體代謝，具有重要的生理功能；其中α；亞單位作為電壓感受器，具有離子選擇性，能為鈣拮抗劑等多數(shù)藥物提供結(jié)合位點(diǎn)并形成跨膜的親水通道，是最重要的亞單位，其編碼基因(CACNA1S)突變會(huì)導(dǎo)致人低鉀性周期性麻痹和惡性高溫綜合征。人的CACNA1S基因被定位在1號(hào)染色體(1q31-32)，而對(duì)于豬和其它動(dòng)物尚未見(jiàn)報(bào)道。應(yīng)用輻射雜種細(xì)胞系(RH panel)進(jìn)行基因定位是繼熒光原位雜交技術(shù)(F

2、ISH)后新近發(fā)展起來(lái)的一種有效的基因定位方法；該法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果直觀，能快速準(zhǔn)確地提供可靠的基因定位信息。本研究根據(jù)人CACNA15基因3'端非翻譯區(qū)序列設(shè)計(jì)引物，對(duì)豬基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序，與人相應(yīng)序列作同源性比較；然后采用IMpRHpanel將CACNA1S基因定位于豬10p11-12。 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)人CACNA1S基因序列設(shè)計(jì)引物，通過(guò)RT-PCR和跨內(nèi)含子擴(kuò)增等方法得到豬CACNA1S基因約5380 bp序列，

3、其中外顯子部分為2000 bp，內(nèi)含子部分約3380bp，經(jīng)與人該基因相應(yīng)部分外顯子序列比較，同源性為64.6％-97.4％。運(yùn)用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)其中3045 bp的DNA序列進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)56個(gè)SNP突變點(diǎn)，其中外顯子序列(1342bp)25個(gè)，內(nèi)含子序列(1703 bp)31個(gè)。在10個(gè)檢測(cè)片斷中：由引物對(duì)1S-47和1S-73所擴(kuò)增片斷未檢測(cè)到多態(tài)SNP位點(diǎn)；其余引物對(duì)擴(kuò)增片斷均具有較好的多態(tài)性；根據(jù)三個(gè)多

4、態(tài)的SNP's位點(diǎn)，設(shè)計(jì)了三個(gè)PCR-RFLP檢測(cè)方法，并進(jìn)行了基因型檢測(cè)。 采用一般線性模型法分析了各基因位點(diǎn)對(duì)豬胴體性狀及肉質(zhì)性狀的遺傳效應(yīng)，結(jié)果顯示：位點(diǎn)1S-46對(duì)系水力存在極顯著的影響(P<0.01)，對(duì)肉色(L)、眼肌面積存在顯著的影響(0.01

5、D基因型，BD基因型顯著性地大于DD基因型， BB基因型對(duì)眼肌面積的影響顯著地大于BC、CC、DD基因型，CD基因型顯著地大于DD基因型；位點(diǎn)1S-74對(duì)后腿重、背膘厚(中)和系水力均存在極顯著的影響(P<0.01)，對(duì)頭重的影響也較大；其中AA、AB基因型對(duì)后腿重的影響顯著地大于AE基因型，AC基因型對(duì)背膘厚(中)的影響顯著地大于AA、AB、AD、AE基因型，AC、AD、AE基因型對(duì)系水力的影響顯著地大于AB基因型。位點(diǎn)1S-61對(duì)后

6、腿重存在極顯著的影響(P<0.01)，對(duì)活重的影響較大：其中AB基因型對(duì)后腿重的影響顯著性地大于BC、CC基因型，AA基因型顯著性地大于BB基因型。位點(diǎn)1S-64對(duì)大腿溫度存在極顯著性的影響(P<0.01)，對(duì)眼肌溫度存在顯著性影響(0.01

7、P<0.05)，其中AA基因型顯著性地大于AB、AC、BB基因型。位點(diǎn)1S-72對(duì)后腿重存在極顯著性的影響(P<0.01)，對(duì)后腿肌肉重和背膘厚(前)影響較大；其中DD基因型對(duì)后腿重的影響顯著性地大于AA基因型，AA、AB基因型顯著性大于CC基因型：對(duì)后腿肌肉重的影響以DD基因型顯著性大于AA基因型，對(duì)背膘厚(前)的影響以BB基因型顯著性地大于CC基因型，DD基因型顯著性的大于AA、CC基因型。酶切位點(diǎn)Ec072 I對(duì)后腿肌肉重和肉色(