瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查

1、瘧原蟲實(shí)驗(yàn)室檢查,上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院王劍飚64370045-600612,背景,瘧疾在我國古代稱為瘴氣，國外稱malaria，為意大利文mala（不良）與aria（空氣）二字合成。本病是由雌按蚊叮咬人體，將其體內(nèi)寄生的瘧原蟲傳入人體而引起的。瘧疾是以周期性冷熱發(fā)作為最主要特征，脾腫大、貧血以及腦、肝、腎、心、腸、胃等受損引起的各種綜合征,分類,寄生于人體的瘧原蟲有4種，即間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧,發(fā)病機(jī)制,瘧原蟲

2、在紅細(xì)胞中增殖成裂殖子，使紅細(xì)胞脹大破裂時(shí)，大量的裂殖子和瘧原蟲代謝產(chǎn)物進(jìn)入血流，引起異性蛋白反應(yīng)，機(jī)體肌肉收縮產(chǎn)熱，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬細(xì)胞功能增強(qiáng)，故可引起肝、脾腫大，多次發(fā)作可致貧血等。瘧原蟲在紅細(xì)胞內(nèi)增殖成熟所需時(shí)間不同，間日瘧和卵形瘧為48小時(shí)，三日瘧為72小時(shí)，惡性瘧為24～48小時(shí)，故臨床上出現(xiàn)周期性發(fā)作,生活史,,抗瘧原蟲治療,控制臨床發(fā)作的藥物：氯喹、青蒿素類（青蒿素、蒿甲醚、青蒿琥酯、雙氫青蒿素）。 防止復(fù)發(fā)：伯氨

3、喹啉 、磷酸哌喹,實(shí)驗(yàn)室檢查,血片的制作血片的染色瘧原蟲的鏡檢,載玻片：無油跡、無灰塵，無劃痕、清潔推片：邊緣光滑無缺口采血部位：耳垂、手指、足跟血液量：薄血膜1-1.5mm3，厚血膜4-5mm3推片與載玻片的角度：25-30度大?。罕⊙?.5-2cm，厚血膜直徑0.8-1cm,血片制作,血片制作,位置：通常是將厚、薄血膜涂在一張載片上。方法是將載片分為6等分，第1、2格備貼標(biāo)簽及編號用；厚血膜在第2、第3格的交界處，

4、薄血膜在第3格中央至第6格中部。作為標(biāo)本的血片每張玻片涂厚、薄血膜各1個(gè)?；?qū)⑤d片分為6等分，第1、2格備貼標(biāo)簽及編號用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前緣至第6格中部。,血片的制作—采血,玻片的執(zhí)持,厚血膜的位置：第2第3格中央,,,推片邊緣沾取少量血液至玻片中部,,玻片和推片之間角度25-30度,,呈舌狀樣的薄血膜（2㎝寬）,,血片的染色,染色前的處理薄血膜用甲醇固定厚血膜進(jìn)行溶血,薄血膜用甲醇固定,,厚血膜必須當(dāng)天

5、溶血，一般不宜超過 24 小時(shí),經(jīng)甲醇固定、溶血處理后的血片,吉氏染液:吉氏（ Giemsa ）染劑粉 0.5 克甘油 25 毫升甲醇 25 毫升瑞氏染液:瑞氏染劑粉 0.2

6、 克甲醇 100 毫升甘油 3 毫升（染液配制好后要過濾）,染液（原液）配方,吉氏染液配制,吉氏染劑粉→研缽→甘油→研磨→甲醇洗去甘油溶液→有色玻璃瓶中→每日用力搖動5min，室溫 一月后應(yīng)用。（此染液為原液）,吉氏染色方法,成批染色： 3 ％的吉氏稀釋液滴加(

7、或在染色缸內(nèi)染色亦可），→ 30 分鐘→用水沖干凈，涼干。單片染色：1毫升蒸餾水加1滴吉氏原液，染色 30-40 分鐘； (或 10%吉氏稀釋液，染色 10-15 分鐘) 。其他同上。,瑞氏染液配制,將瑞氏染劑粉1g置于研缽內(nèi)，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研缽中的甘油溶液，倒入瓶中，搖勻后置室溫下，每天搖動5分鐘，3天后即可使用。,瑞氏染色方法,厚、薄血膜間用蠟筆劃一橫線。薄血膜不用固定，厚血

8、膜需溶血。在薄血膜上滴加瑞氏染液5－8滴，染色2分鐘后，再加與染液等量的水于薄血膜上，用吸管將染液與蒸餾水混合均勻后，把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色10分鐘。用清水輕輕沖去染液，晾干。,厚薄血膜的標(biāo)準(zhǔn),厚血膜血量適宜，不宜過多或過少 薄血膜平整，無皺折和空泡，紅細(xì)胞單層排列,血量血膜的厚薄血膜的固定染液（原液）質(zhì)量、陳舊染液濃度、氣溫及染色時(shí)間稀釋液配制時(shí)間稀釋用水的酸堿度鏡檢技能（滴加鏡油，100倍油鏡頭檢

9、查；自上而 下、自左而右逐個(gè)視野順序檢查）顯微鏡質(zhì)量,血片的制作、染色、鏡檢中應(yīng)注意的事項(xiàng),,自動化染片,,鏡檢,瘧原蟲三要素 核---鮮紅色 胞漿---藍(lán)色 瘧色素---黃褐色或黑褐色，,薄血膜中常見的血液成分,人類四種瘧原蟲的基本特征,間日瘧原蟲惡性瘧原蟲三日瘧原蟲卵形

10、瘧原蟲,,環(huán)狀體滋養(yǎng)體裂殖體配子體,瘧原蟲圖譜,間日瘧 三日瘧 惡性瘧 卵形瘧,,,,間日瘧早期滋養(yǎng)體--環(huán)狀體,約占寄生紅細(xì)胞的1/3，很少見到一個(gè)紅細(xì)胞寄生2個(gè)環(huán)狀體和一個(gè)環(huán)狀體有2個(gè)核。,間日瘧滋養(yǎng)體-大滋養(yǎng)體,經(jīng)8～10小時(shí)，蟲體增大，胞質(zhì)增多，伸出偽足。出現(xiàn)黃褐色的瘧色素。紅細(xì)胞脹大，變形，顏色變淡，并出現(xiàn)數(shù)量較多，淡紅色的小點(diǎn)，稱薛氏小點(diǎn),,間日瘧裂殖體,2.1 未成熟裂殖體

11、（immature  schizont）,經(jīng)40小時(shí)晚期滋養(yǎng)體發(fā)育成熟，蟲體變圓，空泡消失核開始分裂又稱裂殖體前期色素聚集成團(tuán)塊,成熟裂殖體約有12－24個(gè) 細(xì)胞核胞漿也隨之分裂受染RBC 脹大、顏色蒼白、蟲體幾乎充滿紅細(xì)胞,間日瘧原蟲雌配子體,蟲體較大，占滿脹大的紅細(xì)胞胞質(zhì)致密，色深藍(lán)核小致密，深紅色，多位于蟲體一側(cè)瘧色素分散,,間日瘧原蟲雄配子體,蟲體較小，占滿脹大的紅細(xì)胞胞質(zhì)淺藍(lán)核大疏松，淡紅色，多位于

12、蟲體的中央。瘧色素分散,,紅細(xì)胞通常漲大 薛氏點(diǎn)明顯 成熟環(huán)狀體粗大滋養(yǎng)體有阿米巴樣偽足可見不同發(fā)育期的原蟲,間日瘧（P. vivax ）鑒定要點(diǎn),惡性瘧原蟲--環(huán)狀體,環(huán)纖細(xì),約為RBC直徑的1/6，RBC不脹大可見數(shù)粒，大小不一，紅色粗大的茂氏點(diǎn)核1個(gè)，但2個(gè)常見，紅細(xì)胞常含2個(gè)以上原蟲蟲體常位于紅細(xì)胞的邊緣 ，呈“飛鳥狀”不帶色素,惡性瘧原蟲—大滋養(yǎng)體,一般不出現(xiàn)在外周血蟲體小結(jié)實(shí)，圓形，不活動瘧色素集中一團(tuán)

13、，黑褐色原蟲此時(shí)開始集中在內(nèi)臟毛細(xì)血管,惡性瘧成熟裂殖體,裂殖子8～36個(gè)，通常18～24個(gè)，排列不規(guī)則瘧色素集中成一團(tuán)蟲體占紅細(xì)胞體積的2/3至3/4,惡性瘧原蟲雌配子體,新月形，兩端較尖核致密，深紅色，常位于中央瘧色素黑褐色，分布于核周圍,惡性瘧原蟲雄配子體,臘腸形，兩端鈍圓胞質(zhì)色藍(lán)而略帶紅核疏松，淡紅色，位于中央瘧色素黑褐色，小桿狀，在核周圍較多,,環(huán)狀體纖細(xì), 紅細(xì)胞不漲大一個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)可有幾個(gè)環(huán)狀體 環(huán)狀體內(nèi)

14、可有2個(gè)核 環(huán)狀體可貼在紅細(xì)胞邊緣 血片中沒有其他發(fā)育期，通常只有環(huán)狀體和配子體配子體呈新月形或臘腸形 可出現(xiàn)茂氏點(diǎn),惡性瘧（P.falciparum）鑒定 要點(diǎn),惡性瘧的發(fā)育特性,惡性瘧原蟲由于在發(fā)作間歇期，絕大部分瘧原蟲要進(jìn)入內(nèi)臟毛細(xì)血管發(fā)育，周圍血液內(nèi)僅能發(fā)現(xiàn)環(huán)狀體和配子體。惡性瘧在發(fā)作期為最適宜的查血時(shí)間。,,環(huán)狀體可呈方形帶狀形是特點(diǎn) 成熟裂殖體呈菊花狀,內(nèi)含6～12個(gè)裂殖子 紅細(xì)胞不漲大，略縮小有時(shí)有西門氏

15、點(diǎn),三日瘧（P.malariae）診斷要點(diǎn),,,三日瘧原蟲6-12個(gè)裂殖子，排列較規(guī)則，呈菊花狀，瘧色素在蟲體中央，寄生的紅細(xì)胞無變化,三日瘧原蟲,,卵形瘧（P. ovale）診斷要點(diǎn),紅細(xì)胞略漲大或不變大 紅細(xì)胞邊緣呈車輪狀環(huán)狀體有時(shí)呈現(xiàn)魚眼狀薛氏點(diǎn)明顯 成熟裂殖體類似三日瘧原蟲,但更粗大原蟲呈卵圓形,薄血膜中間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲形態(tài)鑒別,薄血膜中間日瘧原蟲與惡性瘧原蟲形態(tài)鑒別,厚薄血膜的優(yōu)缺點(diǎn),厚血膜中間日瘧原蟲與惡性

16、瘧原蟲形態(tài)鑒別,,,1. 一般提倡查厚血膜，薄血膜作為原蟲蟲種的鑒定。 2. 根據(jù)瘧原蟲的三要素來鑒別 (核 胞漿 瘧色素 ) 。多數(shù)情況只要具備瘧原蟲三要素中的兩個(gè)就能加以斷定，如只看到瘧色素也能斷定。 (薄血膜鏡檢以血膜尾部為主) 3. 世界衛(wèi)生組織建議，門診血片至少厚血膜鏡檢 100 個(gè)視野，薄血膜 300 個(gè)視野。,瘧原蟲鑒別提示,瘧原蟲抗原檢測,,鑒別診斷,其他血液寄生蟲?。ńz蟲病、錐蟲病、巴貝西蟲病、附紅體病等）,謝謝