1.免疫磁性海藻酸鈉復合微球的研制及在腫瘤早期診斷中的應用;2.bira酶基因表達載體的構建、原核表達及表達產物的活性鑒定

1、華中科技大學博士學位論文1.免疫磁性海藻酸鈉復合微球的研制及在腫瘤早期診斷中的應用;2. BirA酶基因表達載體的構建、原核表達及表達產物的活性鑒定姓名：李青申請學位級別：博士專業(yè)：免疫學指導教師：吳雄文;李富榮20070501華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論 文 3 研究磁性復合微球表面化學基團的植入方法，在微球表面接入 6- 氨基正己酸“ 手臂” 分子，將功能基團的手臂延伸 6 個碳原子長度，然后以兩

2、步法蛋白縮和的方法將羊抗鼠 IgG 二抗與微球聯(lián)接，制備免疫磁性微球，并對抗體交聯(lián)微球的反應條件進行優(yōu)化。實驗證明用此方法制備的免疫磁性微球抗體吸附量達 111.2µg/mg，交聯(lián)抗體后流式細胞術檢測 98.3％的磁性微球具有免疫活性。 3．建立腫瘤細胞磁性富集與檢測系統(tǒng)，對肺癌患者外周血微轉移癌細胞進行臨床驗證 制備羊抗鼠 IgG 二抗包被的免疫磁性微球， 將免疫磁性分離技術與免疫細胞化學技術相結合建立肺癌細胞磁性富集與檢測

3、系統(tǒng)。鑒定該檢測系統(tǒng)的特異性、靈敏性和穩(wěn)定性，并進行肺癌患者外周血腫瘤細胞的臨床驗證。與單純的免疫細胞化學檢測技術及 RT- PCR 檢測技術相比較，本論文建立的磁性富集與檢測系統(tǒng)具有靈敏度高、特異性強和穩(wěn)定性好的特點，進行肺癌臨床驗證結果顯示本檢測系統(tǒng)檢測率與 RT- PCR檢測技術所檢測的結果相當，無顯著性差異（p>0.05） ，同時無假陽性結果出現，比單純的免疫細胞化學檢測技術檢出率高，存在顯著差異（p<0.05） 。

4、 4．建立磁性化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，應用于腫瘤標志物 AFP 的測定。 制備羊抗兔 IgG 二抗包被的免疫磁性微球， 將免疫磁性分離技術與化學發(fā)光技術相結合，建立磁性化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，優(yōu)化檢測系統(tǒng)的條件，鑒定其特異性、靈敏性和穩(wěn)定性，并應用于患者外周血 AFP 的測定。實驗證明本論文建立的磁性化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)具有靈敏度高、特異性強和穩(wěn)定性好的特點，進行患者外周血 AFP的測定結果有很好的臨床相符性。 本研究制備的新型納米磁性復合

5、微球，以 碳包鐵( F e @ C ) 納米顆粒作為磁性內核，解決了氧化鐵內核磁性能不夠的難題，性能優(yōu)良；在 交聯(lián)抗體時于微球與抗體之間連接一個手臂分子，避免了由于位阻效應導致的微球表面抗體與相應抗原結合不完全的弊端，更有利于微球功能的發(fā)揮。在此基礎上，納米磁性復合微球作為公共載體和分離工具應用于磁性富集與檢測系統(tǒng)和磁性化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)，實驗證明方便易行，具有廣泛的應用前景。 【關鍵詞】反相微乳法，免疫磁性微球，富集，微轉移，化學發(fā)