結(jié)構(gòu)域連接區(qū)對蛋白A多聚體結(jié)合效能影響的研究.pdf

1、蛋白A親和介質(zhì)純化抗體是目前最為常用的抗體純化制備手段之一，具有純度高、回收率高等優(yōu)點，但是其保存要求和制備成本也較高且實際的結(jié)合效能不高。改造蛋白A的結(jié)構(gòu)，提高抗體結(jié)合的效能，是降低抗體純化成本的重要途徑。
　　現(xiàn)有的重組蛋白A和天然蛋白A實際結(jié)合抗體的摩爾數(shù)低于所含抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的數(shù)目，未發(fā)揮出理論結(jié)合量，理論分析可能是因為蛋白A原始結(jié)構(gòu)域連接區(qū)很短，結(jié)構(gòu)域結(jié)合抗體后體積增大，空間位阻限制了全部結(jié)構(gòu)域同時結(jié)合抗體。如果加長結(jié)構(gòu)

2、域連接區(qū)并提高彈性，就能夠減少空間位阻效應(yīng)，提高結(jié)構(gòu)域同時結(jié)合抗體的能力，從而提高蛋白A親和介質(zhì)的載量?？贵w分子在自然中進化出了能夠結(jié)合各種大小的抗原的能力。分子模擬發(fā)現(xiàn)Fab和Fc結(jié)構(gòu)域間連接區(qū)，即鉸鏈區(qū)較長，富含脯氨酸，其結(jié)構(gòu)更具靈活性，用抗體中的鉸鏈連接蛋白A的結(jié)構(gòu)域理論上能夠起到減少空間位阻從而增加抗體結(jié)合效能的作用。
　　本論文設(shè)計了用抗體鉸鏈區(qū)連接蛋白A抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的6種變體蛋白A，利用分子克隆的方法，構(gòu)建了6個重組