基于DNA雜交鏈反應放大策略的DNA甲基化轉移酶活性及羥甲基化程度電化學分析.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩66頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、DNA甲基化是目前研究最多的DNA表觀遺傳修飾之一。DNA甲基化由DNA甲基轉化移酶催化完成的。由于DNA甲基化狀態(tài)是可被逆轉的,也就是存在DNA去甲基化過程,但相對于甲基化過程,去甲基化過程更加復雜。DNA的甲基化與去甲基化這兩個過程相互平衡,維持了DNA甲基化模式的穩(wěn)定。大量研究表明,許多重要的過程如胚胎發(fā)育和細胞周期調控都與甲基化息息相關,而多個癌癥也表現出異常的甲基化模式。因此,發(fā)展簡易、靈敏、準確、可靠的用于定位、定量分析DN

2、A甲基化的方法是至關重要的。相對于其他方法,電化學擁有如檢測時間短、操作簡單、費用低、易于小型化等諸多優(yōu)勢,是一種具有良好發(fā)展前景的分析測試方法。本論文旨在建立某些疾病DNA的電化學、去甲基化程度的電化學檢測方法,為某些疾病的臨床診斷和治療觀察提供準確、快速和靈敏的方法。本論文的主要工作是通過DNA雜交鏈反應,實現DNA甲基化、去甲基化狀態(tài)及DNA甲基化轉移酶的電化學信號放大檢測。
  1.DNA甲基化轉移酶(MTase)活性與腫

3、瘤發(fā)生,發(fā)展密切相關。本文建立了免標記超結構電化學方法用于信號放大檢測DNA甲基轉移酶活性(例如使用M.SssI甲基化轉移酶)??刂乒潭ㄔ诮痣姌O上低密度的DNA有利于形成DNA超結構,從而有效地實現信號放大。以RuHex作為電化學信號分子,可以靜電吸附到雙鏈DNA上,實現了免標記的電化學檢測。實驗證明,使用差分脈沖伏安法(DPV)能夠有效的檢測DNA甲基化轉移酶的活性,線性范圍為0.5-120U/mL,信噪比為3時,檢出限為0.025U

4、/mL。此外,在細胞裂解液內依然可以檢測甲基化轉移酶的活性。同時,本文也證實了該方法應用于快速估測和篩選甲基化轉移酶抑制劑,它可以有助于探索與甲基化相關的抗癌藥物。
  2.DNA去甲基化過程是DNA甲基化的可逆過程,研究發(fā)現,5-甲基胞嘧啶(5mC)在TET酶的催化氧化作用下生成5-羥甲基胞嘧啶(5hmC),5hmC的發(fā)現為DNA去甲基化研究提供了新的思路。且5hmC在體細胞重編程,胚胎發(fā)育和啟動哺乳動物DNA去甲基化中有重要作

5、用。因此檢測DNA樣品中5hmC的含量是十分必要的。在本文中,我們建立了基于DNA雜交鏈反應(HCR)信號擴增電化學方法用來有效的量化DNA羥甲基化程度。當DNA序列中羥基化的胞嘧啶在UDP-glucose存在下被T4-βGT作用形成5ghmC,并阻礙MspJI識別剪切,經輔助DNA(FcA-S3&S4)雜交作用后,與吸附到DNA鏈上的RuHex形成電子轉移通道,使信號放大。(I2-I0/I1-I0)代表雙鏈DNA羥基化比例,實驗證明,

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論