甲殼動(dòng)物DNA甲基轉(zhuǎn)移酶2（Dnmt2）基因的分子特征、表達(dá)分析及DNA甲基化水平檢測(cè).pdf

1、浙江大學(xué)博士學(xué)位論文甲殼動(dòng)物DNA甲基轉(zhuǎn)移酶2（Dnmt2）基因的分子特征、表達(dá)分析及DNA甲基化水平檢測(cè)姓名：馮琛卓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生化與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：楊衛(wèi)軍20070401蜇逗太堂遵堂位監(jiān)室鹵蟲和羅氏沼蝦Dnmt2基因的分子特征、表達(dá)分析及DNA甲基化水平檢測(cè)摘要迄今為止，已知的真核生物DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(Dnmt)有三大家族：DNA甲基轉(zhuǎn)移酶l(Dnmtl)、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶2(Dnmt2)和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3(Dnm

2、O)。這三大家族在蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)上都具有十個(gè)較為保守的模體(motif)。在生物體內(nèi)，它們以s一腺苷一L一甲硫氨酸為甲基化供體，催化DNA上胞嘧啶的甲基化反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控。在這三大家族中，Dnmtl和Dnmt3的生物學(xué)功能較為清楚，它們是哺乳動(dòng)物發(fā)育過程中必需的基因，它們的缺失會(huì)導(dǎo)致哺乳動(dòng)物的死亡。然而，由于I)mm2基因的缺失體都未表現(xiàn)出較為明顯的表型變化，因此Dnmt2的生物學(xué)功能還尚未清楚。分析Dnmt2基因的結(jié)構(gòu)

3、與表達(dá)特征對(duì)研究其生物學(xué)功能有著重要的意義。本研究以甲殼動(dòng)物鹵蟲ArtemiafrancScana和羅氏沼蝦Macrobrachiumrosenbergii為研究對(duì)象，通過對(duì)Dnmt2基因的表達(dá)分析以及DNA甲基化水平的測(cè)定，闡明了Dnmt2基因的表達(dá)變化與鹵蟲和羅氏沼蝦的胚胎發(fā)育有著密切的關(guān)系，但與DNA甲基化水平?jīng)]有明顯的相關(guān)性。本研究為Dnmt2基因在甲殼動(dòng)物中功能的研究奠定了基礎(chǔ)，其結(jié)果主要包括以下三個(gè)方面：1采用CODEHOP

4、兼并引物方法，在甲殼動(dòng)物鹵蟲和羅氏沼蝦中分離得到Dnmt2基因，并各自命名為AtDnmt2和MarDnmt2。我們獲得的AfDnmt2eDNA長(zhǎng)度為1054bp，包含了一個(gè)1140bp長(zhǎng)度的開放式閱讀框(openreadingframe。ORF)。此開放式閱讀框編碼379個(gè)氨基酸殘基；MarDnmt2eDNA全長(zhǎng)為1472bp，包含一個(gè)1191bp長(zhǎng)度的開放式閱讀框，此開放式閱讀框編碼編碼396個(gè)氨基酸殘基。AfDnmt2和MarDnm