運動性疲勞大鼠心室肌蛋白質(zhì)組差異性表達的研究.pdf

1、本研究采用蛋白質(zhì)組學(xué)的理論與技術(shù)，建立安靜和遞增運動負(fù)荷訓(xùn)練后大鼠心室肌蛋白質(zhì)組的差異性表達圖譜，初步篩選出對運動應(yīng)激具有重要意義的心室肌目標(biāo)蛋白質(zhì)，從蛋白質(zhì)組學(xué)定量與定性研究的角度探討運動性心肌疲勞的發(fā)生規(guī)律。 以10只雄性SD大鼠為研究對象，隨機分為對照組和運動實驗組，運動組經(jīng)過7周大強度遞增運動負(fù)荷訓(xùn)練后(最后一次力竭)6小時和對照組同時麻醉處死，提取心室肌組織的全蛋白樣品。采用雙向凝膠電泳進行蛋白樣品分離，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)G

2、-250染色后，采用PD-Quest軟件進行圖像分析和數(shù)據(jù)采集。選擇運動后“缺失”和差異性表達量在5倍以上的目標(biāo)蛋白質(zhì)點進行膠內(nèi)原位酶解和質(zhì)譜鑒定。 實驗結(jié)果表明，對照組和運動組樣品蛋白質(zhì)點的平均匹配率分別為79％±10.46％和77.1％±8.23％，平均相關(guān)系數(shù)為0.73，獲得了重復(fù)性較好雙向考染圖譜。對照組與運動組蛋白質(zhì)點數(shù)目分別為352±17和338±17個。運動后表達差異的點共有99個，運動后消失的點有5個；上調(diào)和下調(diào)

3、5倍及5倍以上的各有12個；表達量上調(diào)2倍及以上的有52個，下調(diào)2倍及以上的有42個。9個目標(biāo)蛋白點共鑒定出7個蛋白質(zhì)：運動后“缺失”的蛋白質(zhì)有心肌特異性長鏈脂酰輔酶A脫氫酶、線粒體電子傳遞鏈復(fù)合體I最大的亞基、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75、原肌球蛋白1α鏈；運動后表達上調(diào)的蛋白質(zhì)有腈水解酶家族成員2；運動后表達下調(diào)的蛋白質(zhì)有心肌α-肌球蛋白重鏈和一個分子量為21KDa的未知蛋白。在長時間大強度的運動應(yīng)激條件下，大鼠的心室肌中的蛋白質(zhì)組發(fā)生了顯著

4、的變化。運動后“缺失”和下調(diào)的蛋白質(zhì)點與心肌收縮的調(diào)控失衡和能量代謝的方式轉(zhuǎn)變，以及細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)，表明遞增運動負(fù)荷訓(xùn)練后，心肌疲勞的發(fā)生與心肌收縮力的下降、能量供給困難和心肌細(xì)胞的損傷有關(guān)。 值得重視的是，采用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，成功地篩選出心肌特異性長鏈脂酰輔酶A脫氫酶和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白75等6種在運動醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中尚未涉足的，具有運動應(yīng)激特點的，對研究運動心臟具有重要意義的目標(biāo)蛋白質(zhì)，為深入研究運動性心肌疲勞提供了新的思路，奠