酵母粉誘導(dǎo)重組人甲狀旁腺激素表達研究.pdf

1、人甲狀旁腺激素(Trx-hPTH)是人體內(nèi)由甲狀旁腺主細(xì)胞分泌的多肽類激素，具有調(diào)節(jié)鈣磷平衡功能，由84個氨基酸組成，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)它能夠促進人體對Ca2+的重吸收和磷酸鹽的排出，刺激軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞分裂，增加骨基質(zhì)密度，是治療骨質(zhì)疏松癥的蛋白藥物。
　　 本文以大腸桿菌E.coli BL21(DE3)為宿主，pET32a為表達載體，進行人甲狀旁腺激素的發(fā)酵表達，首先研究了在不同培養(yǎng)基中菌體生長和融合蛋白表達的特性，篩選出TB培養(yǎng)

2、基作為發(fā)酵培養(yǎng)基，研究重組菌在搖瓶培養(yǎng)時的最佳發(fā)酵條件，選用LB培養(yǎng)基作為活化培養(yǎng)基，TB培養(yǎng)基作為發(fā)酵培養(yǎng)基，研究在不同培養(yǎng)條件下菌體濃度和目的蛋白表達量，優(yōu)化發(fā)酵結(jié)果如下：用自來水配制培養(yǎng)基，pH為7，37℃下培養(yǎng)，活化培養(yǎng)5.5h后加誘導(dǎo)劑IPTG，IPTG終濃度為0.2mM，誘導(dǎo)3.5h時，Trx-hPTH的胞內(nèi)蛋白量達到最大。
　　 同時在實驗中發(fā)現(xiàn)不添加外源誘導(dǎo)劑時，目標(biāo)蛋白也有表達，這與培養(yǎng)基中的酵母粉有關(guān)，本文對

3、酵母粉的誘導(dǎo)規(guī)律進行研究，比較了三個品牌的酵母粉的誘導(dǎo)效果，三個品牌分別是BBI，Sangon，OXIOD，研究發(fā)現(xiàn)用不同的水源(蒸餾水和自來水)配制培養(yǎng)基，目標(biāo)蛋白表達結(jié)果有差異，Sangon酵母粉在兩種水源的培養(yǎng)基中都能表達，BBI在兩種培養(yǎng)基中均不能表達，OXIOD酵母粉在蒸餾水的培養(yǎng)基中無明顯表達，在自來水配制的培養(yǎng)基中表達顯著。OXIOD酵母粉在濃度大于24g/l時能誘導(dǎo)大量目標(biāo)蛋白表達。對OXIOD酵母粉進行分離，先后使用透