大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的組織工程學(xué)研究.pdf

1、由于各種原因?qū)е碌墓侨睋p和壞死的治療是需要多學(xué)科協(xié)作的臨床難題.該實(shí)驗(yàn)改進(jìn)取材方法,體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs);體外礦化誘導(dǎo)MSCs,為骨組織工程提供種子細(xì)胞.利用自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和珊瑚羥基磷灰石(Coral Hydroxyapatite,CHA)、羥基磷灰石磷酸三鈣(Hydroxyapatite/Tricalcium Phosphate,HA/TCP)、聚乳酸

2、聚乙醇酸共聚物(Polylacticcoglycollic Acid,PLGA)和藻酸鹽凝膠四種支架材料復(fù)合制成組織工程化骨,并采用組織工程化骨修復(fù)大鼠顱骨極量缺損以觀察并比較此四種組織工程化骨的骨修復(fù)效果.以藻酸鹽凝膠為支架材料,以經(jīng)體外軟骨向誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為種子細(xì)胞,構(gòu)建組織工程化軟骨,植入大鼠體內(nèi)異位成軟骨.利用聚乳酸聚乙醇酸(PLGA)和藻酸鹽凝膠作為支架材料,與大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合制成組織工程化骨,并探討和比較

3、其在裸鼠體內(nèi)異位成骨的能力.采用改進(jìn)取材法取大鼠脛骨,沖取骨髓,密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法分離純化大鼠骨髓MSCs,傳代擴(kuò)增并進(jìn)行常規(guī)礦化誘導(dǎo).采用改進(jìn)取材法與密度梯度離心及貼壁培養(yǎng)法相結(jié)合的分離培養(yǎng)方法能大幅度降低污細(xì)胞污染率及實(shí)驗(yàn)動物的死亡率、有效分離純化大鼠骨髓MSCs.礦化誘導(dǎo)對細(xì)胞的增殖有一定抑制作用;經(jīng)礦化誘導(dǎo)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有成骨細(xì)胞的表征.采用組織工程化骨修復(fù)大鼠顱骨極量缺損,X光片檢測證實(shí)藻酸鹽凝膠和PLGA組

4、在缺損區(qū)均有鈣化密度增高表現(xiàn),其中以藻酸鹽凝膠組密度升高更為顯著.組織學(xué)、免疫組織化學(xué)檢測均顯示實(shí)驗(yàn)組內(nèi)各種復(fù)合物內(nèi)均有新骨形成,其中CHA和藻酸鹽凝膠兩組所成的新骨量較多.采用組織工程化軟骨植入大鼠背部皮下,術(shù)后4周未見軟骨形成,術(shù)后8周有明顯的大量軟骨形成.常規(guī)組織學(xué)切片(HE染色及奧新藍(lán)特染)后發(fā)現(xiàn)有大量軟骨形成.軟骨內(nèi)仍可見細(xì)胞團(tuán),軟骨細(xì)胞周圍基質(zhì)豐富,藻酸鹽凝膠降解明顯.Ⅱ型膠原免疫組化及原位雜交均為陽性,從而在蛋白水平和分子