腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞通過(guò)NF-κB通路促進(jìn)食管癌細(xì)胞遷移侵襲.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:
  食管癌是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,位列癌癥死亡病因的第6位。食管癌患者就診時(shí)常常并發(fā)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,這也是食管癌致死率居高不下的原因之一。腫瘤微環(huán)境與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系,而M2型巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境的主要構(gòu)成成分,稱之為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs),能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在胃癌、乳腺癌和口腔鱗癌等腫瘤當(dāng)中都已證實(shí)TAMs與腫瘤細(xì)胞的分化生長(zhǎng)侵襲轉(zhuǎn)移成正相關(guān),與預(yù)后成負(fù)相關(guān)。已有研究表明在食管癌組織中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)密度

2、較癌旁正常組織明顯增加,但其對(duì)食管癌的具體作用機(jī)制未見(jiàn)闡明。另一方面,核轉(zhuǎn)錄因子κB(NF-κB)可以通過(guò)調(diào)控鈣黏蛋白、MMPs等粘附因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲。因此,本實(shí)驗(yàn)將探討TAMs對(duì)食管癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響和分子機(jī)制,以及NF-κB在其中的地位,為臨床食管癌治療提供潛在的靶點(diǎn)及新的理論依據(jù)。
  方法:
  ⑴用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RMPI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人單核細(xì)胞株THP-

3、1。用含10%胎牛血清、100U/ml鏈霉素和100U/ml青霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人食管鱗癌細(xì)胞株EC109。⑵采用佛波酯(PMA)和IL-4體外刺激THP-1,誘導(dǎo)分化為M2型巨噬細(xì)胞,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞膜分子CD204和CD206的表達(dá),鑒定M2型巨噬細(xì)胞是否誘導(dǎo)成功。⑶設(shè)空白對(duì)照組、TAMs組、BAY11-7082(NF-κB抑制劑)處理組、BAY11-7082處理+TAMs組,用transwell小

4、室及BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測(cè)TAMs及經(jīng)NF-κB抑制劑預(yù)處理對(duì)食管癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。⑷設(shè)空白對(duì)照組、TAMs共培養(yǎng)組、BAY11-7082處理組、BAY11-7082處理組+TAMs共培養(yǎng)組,用 western blot檢測(cè) TAMs共培養(yǎng)及經(jīng) NF-κB抑制劑預(yù)處理對(duì)食管癌細(xì)胞NF-κB、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2及MMP-9蛋白表達(dá)水平的影響。

5、>  結(jié)果:
  ①THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA和IL-4刺激后,細(xì)胞貼壁成簇生長(zhǎng),部分細(xì)胞伸出偽足,CD204和CD206表達(dá)增加,說(shuō)明M2型巨噬細(xì)胞(TAMs)誘導(dǎo)成功。②TAMs可促進(jìn)食管癌細(xì)胞株EC109的遷移和侵襲能力,而B(niǎo)AY11-7082逆轉(zhuǎn)了TAMs的作用。③TAMs可上調(diào)EC109細(xì)胞的NF-κB蛋白表達(dá),BAY11-7082可阻斷該作用。④TAMs可誘導(dǎo)EC109細(xì)胞N-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白

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