腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞通過NF-κB通路促進(jìn)食管癌細(xì)胞遷移侵襲.pdf

1、目的：
　　食管癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，位列癌癥死亡病因的第6位。食管癌患者就診時(shí)常常并發(fā)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，這也是食管癌致死率居高不下的原因之一。腫瘤微環(huán)境與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系，而M2型巨噬細(xì)胞是腫瘤微環(huán)境的主要構(gòu)成成分，稱之為腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs），能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在胃癌、乳腺癌和口腔鱗癌等腫瘤當(dāng)中都已證實(shí)TAMs與腫瘤細(xì)胞的分化生長(zhǎng)侵襲轉(zhuǎn)移成正相關(guān)，與預(yù)后成負(fù)相關(guān)。已有研究表明在食管癌組織中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)密度

2、較癌旁正常組織明顯增加，但其對(duì)食管癌的具體作用機(jī)制未見闡明。另一方面，核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）可以通過調(diào)控鈣黏蛋白、MMPs等粘附因子促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲。因此，本實(shí)驗(yàn)將探討TAMs對(duì)食管癌侵襲轉(zhuǎn)移的影響和分子機(jī)制，以及NF-κB在其中的地位，為臨床食管癌治療提供潛在的靶點(diǎn)及新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　⑴用含10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的RMPI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人單核細(xì)胞株THP-

3、1。用含10%胎牛血清、100U/ml鏈霉素和100U/ml青霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人食管鱗癌細(xì)胞株EC109。⑵采用佛波酯（PMA）和IL-4體外刺激THP-1，誘導(dǎo)分化為M2型巨噬細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)巨噬細(xì)胞膜分子CD204和CD206的表達(dá)，鑒定M2型巨噬細(xì)胞是否誘導(dǎo)成功。⑶設(shè)空白對(duì)照組、TAMs組、BAY11-7082（NF-κB抑制劑）處理組、BAY11-7082處理+TAMs組，用transwell小

4、室及BD Matrigel Invasion Chamber小室分別檢測(cè)TAMs及經(jīng)NF-κB抑制劑預(yù)處理對(duì)食管癌細(xì)胞遷移、侵襲能力的影響。⑷設(shè)空白對(duì)照組、TAMs共培養(yǎng)組、BAY11-7082處理組、BAY11-7082處理組+TAMs共培養(yǎng)組，用 western blot檢測(cè) TAMs共培養(yǎng)及經(jīng) NF-κB抑制劑預(yù)處理對(duì)食管癌細(xì)胞NF-κB、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2及MMP-9蛋白表達(dá)水平的影響。

5、>　　結(jié)果：
　?、賂HP-1細(xì)胞經(jīng)PMA和IL-4刺激后，細(xì)胞貼壁成簇生長(zhǎng)，部分細(xì)胞伸出偽足，CD204和CD206表達(dá)增加，說明M2型巨噬細(xì)胞(TAMs)誘導(dǎo)成功。②TAMs可促進(jìn)食管癌細(xì)胞株EC109的遷移和侵襲能力，而BAY11-7082逆轉(zhuǎn)了TAMs的作用。③TAMs可上調(diào)EC109細(xì)胞的NF-κB蛋白表達(dá)，BAY11-7082可阻斷該作用。④TAMs可誘導(dǎo)EC109細(xì)胞N-cadherin、MMP-2、MMP-9的蛋白