基質(zhì)Gla蛋白對(duì)人成骨肉瘤MG63細(xì)胞株骨形成及Wnt-β-catenin信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的：1、觀察人成骨肉瘤MG63細(xì)胞株中MGP基因表達(dá)改變對(duì)其骨形成的影響；2、觀察MGP對(duì)人成骨肉瘤細(xì)胞MG63中Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子的影響，探討MG P在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥防治作用中可能的新機(jī)制。
　　方法：1、MGP基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：將 MG63細(xì)胞分成 MGP過(guò)表達(dá)組及MGP敲低組，過(guò)表達(dá)組用重組質(zhì)粒 pIRES2-EGFP（過(guò)表達(dá)對(duì)照組）及pIRES2-EGFP-MGP（過(guò)表達(dá)組）轉(zhuǎn)染至MG63，敲低

2、組用重組質(zhì)粒pKLO-EGFP（敲低對(duì)照組，）及 pKLO-EGFP-shRNA（敲低組）轉(zhuǎn)染至 MG63細(xì)胞中；2、MG63細(xì)胞骨形成能力檢測(cè)：MG63細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后，用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況，堿性磷酸酶（ALP）染色及活力測(cè)定技術(shù)檢測(cè)MG63細(xì)胞的分化情況，茜素紅 S染色及氯化十六烷基吡啶半定量礦化結(jié)節(jié)檢測(cè)細(xì)胞礦化能力；3、Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子的檢測(cè)：采用Western blot和 QRT-PCR技術(shù)檢測(cè)

3、各組MGP及Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子如wnt3a、β-catenin和 Runx2蛋白及基因的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、CCK-8試驗(yàn)結(jié)果顯示過(guò)表達(dá)MGP48、72、96小時(shí)時(shí)MG63的增殖明顯增加（*P<0.05），而MGP敲低組中MG63的增殖并無(wú)明顯的影響，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；2、ALP染色及活力測(cè)定試驗(yàn)均顯示，過(guò)表達(dá)MGP增強(qiáng)了 MG63細(xì)胞的分化能力，過(guò)表達(dá)組 ALP活力約是對(duì)照組的3倍，

4、相反，敲低MGP則抑制了MG63細(xì)胞的分化，與對(duì)照組相比，敲低組ALP活力約降低了2倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.05）；3、茜素紅S染色及氯化十六烷基吡啶試驗(yàn)顯示MGP可促進(jìn)成骨細(xì)胞的礦化，下調(diào)MGP后MG63細(xì)胞的礦化被抑制，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.05）；4、過(guò)表達(dá) MGP上調(diào) Wnt/β-catenin信號(hào)通路中三個(gè)重要因子wnt3a,β-catenin和 Runx2的表達(dá)，wnt3a,β-catenin和Runx2

5、 mRNA表達(dá)分別是對(duì)照組的5.94倍、4.03倍、9.23倍，蛋白的表達(dá)分別是對(duì)照組的2.73倍、2.32倍、2.28倍，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.05,**P<0.01），反之，敲低MGP下調(diào)wnt3a,β-catenin和Runx2的表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（*P<0.05,**P<0.01）。
　　結(jié)論：1、促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖、分化及礦化可能是 MG P防治骨質(zhì)疏松的機(jī)制之一；2、MGP可能通過(guò)上調(diào)Wnt/β-ca