Tau蛋白與實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經(jīng)軸索損傷的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：
　　研究非磷酸化和磷酸化兩種不同形式tau蛋白在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）小鼠腦組織軸索中不同時(shí)期動(dòng)態(tài)變化及意義。
　　方法：
　　將72只體重18g~20g購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司年齡為8周~10周的C57BL/6雌性小鼠隨機(jī)分為6組,每組12只。按免疫第14天、25天、50天癱瘓程度不同分別定義為急性期、癱瘓期、緩解期小鼠，將6組依次編為EAE急性期組、EAE癱瘓期組、EAE緩解期組、對(duì)照急

2、性期組、對(duì)照癱瘓期組、對(duì)照緩解期組。在免疫第14、25、50天，將每組小鼠12只隨機(jī)分為兩組，每組6只。按每只小鼠需MOG35-55100ug計(jì)算出36只小鼠共需MOG量。將稀釋為3mg/mlMOG與等體積CFA混合,再加入一定量的結(jié)核分枝桿菌素,以刺激免疫，將此液體混合物放入針頭注射器中反復(fù)抽吸，直至混合物呈現(xiàn)渾濁樣改變。在EAE組小鼠脊柱兩側(cè)多點(diǎn)注射乳劑，每只注射總量0.3ml，并在免疫第0天、第2天每只腹腔注射500ng百日咳毒素

3、,作為免疫增強(qiáng)劑。對(duì)照組每只小鼠給予與實(shí)驗(yàn)組等量生理鹽水注射作為對(duì)照。從免疫當(dāng)日起,對(duì)小鼠進(jìn)行每日評(píng)分，直至小鼠處死前，評(píng)分采用國(guó)際通用5分評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)小鼠腦組織進(jìn)行固定、包埋，用HE染色觀察組織炎癥變化，用免疫組化方法觀察不同時(shí)期軸索tau蛋白含量變化；用ELISA法測(cè)量小鼠血清中GSK3濃度。
　　結(jié)果：
　　1.小鼠國(guó)際通用5分評(píng)分法,小鼠逐漸出現(xiàn)以下情況，尾部無(wú)力，由于食欲減退出現(xiàn)皮毛光澤下降；病情逐漸加重出現(xiàn)雙后肢

4、肌張力降低及小腦功能受損出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)，但不影響其日常運(yùn)動(dòng)；小鼠表現(xiàn)為雙后肢無(wú)力加重，影響日常運(yùn)動(dòng)，被動(dòng)翻身后不能恢復(fù)，但刺激后可挪動(dòng)；小鼠表現(xiàn)為雙后肢完全癱瘓，同時(shí)前肢出現(xiàn)肌力減弱；小鼠表現(xiàn)為無(wú)任何肢體運(yùn)動(dòng)，不能完成進(jìn)食，但無(wú)死亡小鼠。免疫緩解期四肢無(wú)力較前緩解。神經(jīng)功能評(píng)分隨時(shí)間推移達(dá)到高分后，當(dāng)疾病進(jìn)入緩解期時(shí)評(píng)分下降。2.對(duì)照組腦組織急性期、癱瘓期未見(jiàn)明顯異常，緩解期組可見(jiàn)生理性軸索萎縮。EAE組急性期腦組織可見(jiàn)炎癥細(xì)胞呈血管套樣

5、浸潤(rùn)；癱瘓期除可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)外，出現(xiàn)白質(zhì)結(jié)構(gòu)松散、組織空泡化；緩解期炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)量有所下降，但遺留軸索萎縮。3.陽(yáng)性軸索表現(xiàn)為腫脹、深染，縱切面呈梭形節(jié)段狀，橫切面呈點(diǎn)狀，節(jié)段狀軸索分節(jié)計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)軸索陽(yáng)性數(shù)，對(duì)照急性期組、癱瘓期組、緩解期組軸索內(nèi)磷酸化tau蛋白表達(dá)數(shù)分別為4.09±1.09、5.82±1.32、7.55±1.62；EAE急性期組、癱瘓組、緩解期磷酸化tau蛋白表達(dá)量28.40±2.60、48.40±3.81、29

6、.42±1.07；EAE癱瘓期組高于EAE急性期組（P<0.01），高于EAE緩解期組（P<0.01）。4.將每組各6只小鼠血清GSK3對(duì)比，EAE組較對(duì)照組增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），EAE組癱瘓期較急性期、緩解期水平高（P<0.01）。5.EAE組小鼠癱瘓期、緩解期血清GSK3與腦組織磷酸化Tau蛋白兩者間存在線(xiàn)性相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　磷酸化tau蛋白含量與小鼠神經(jīng)功能評(píng)分相關(guān)。磷酸化tau蛋白含量和軸