實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠側(cè)腦室周?chē)鶯INGO-1蛋白表達(dá)變化.pdf

1、目的：觀察LINGO-1在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalautoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠側(cè)腦室周?chē)磉_(dá)的時(shí)程變化,探討LINGO-1在EAE發(fā)生、發(fā)展中的可能作用,為在特定的時(shí)間窗內(nèi)采用LINGO-1抗體治療EAE提供線索和實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。
　　方法：雌性Wistar大鼠50只,隨機(jī)分為EAE組25只,對(duì)照組25只。以新鮮豚鼠全脊髓勻漿(guinea pig spinal co

2、rd homogenate,GPSCH)加完全福氏佐劑(complete freund’s adiuvant,CFA)為抗原,免疫接種雌性Wistar大鼠,并輔以百日咳疫苗原漿液(pertussis vaccine,PV)以增加血腦脊液屏障的通透性,建立EAE動(dòng)物模型。EAE組隨機(jī)分為第11、15、18、24、30天5個(gè)時(shí)點(diǎn)亞組,每個(gè)亞組5只。對(duì)照組用9g/L鹽水代替豚鼠全脊髓勻漿,同樣隨機(jī)分為5個(gè)時(shí)點(diǎn)亞組。各亞組大鼠分別在其相應(yīng)時(shí)點(diǎn)處

3、死。觀察各組大鼠發(fā)病、體重變化情況并進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。取大鼠大腦側(cè)腦室周?chē)M織切片進(jìn)行檢測(cè):用蘇木素一伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色后在光鏡下進(jìn)行炎性病灶計(jì)數(shù);采用Luxol堅(jiān)牢藍(lán).焦油紫神經(jīng)髓鞘染色法行髓鞘染色,了解髓鞘脫失情況;采用免疫組織化學(xué)法和半定量計(jì)數(shù)檢測(cè)各組不同時(shí)期大鼠側(cè)腦室周?chē)鶯INGO-1的表達(dá)情況;并采用SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：1.各組大鼠的臨床表現(xiàn):對(duì)照組各亞組大

4、鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中無(wú)發(fā)病,神經(jīng)功能評(píng)分為0,無(wú)體重?fù)p失;抗原免疫后9天左右EAE組大鼠陸續(xù)發(fā)病,至第14、15天左右達(dá)病情高峰期,EAE組先后共有22只大鼠發(fā)病,發(fā)病率為88.00％;EAE組各亞組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分隨病情加重而上升,隨病情緩解而下降,在第15天發(fā)病高峰期達(dá)到最高值;體重?fù)p失也在第15天表現(xiàn)最為顯著。2.各組大鼠側(cè)腦室周?chē)鶫E染色病理結(jié)果:對(duì)照組大鼠腦組織HE染色結(jié)構(gòu)清晰,無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。EAE組大鼠第11天時(shí)腦組織內(nèi)已出現(xiàn)

5、炎性病灶;第15天時(shí)炎性病灶范圍擴(kuò)大、數(shù)目增加;第18天炎性病灶減少、程度減輕;第24天,第30天炎性病灶基本消失。比較EAE組各時(shí)點(diǎn)亞組大鼠側(cè)腦室周?chē)仔圆≡顢?shù),發(fā)現(xiàn)以第15天亞組大鼠炎性病灶數(shù)最多,與第11天、第24天比較差異有顯著性。(P<0.01)3.Luxol堅(jiān)牢藍(lán)-焦油紫神經(jīng)髓鞘染色:對(duì)照組各亞組大鼠腦內(nèi)無(wú)髓鞘脫失。EAE組在抗原免疫后第11天已有輕微的髓鞘脫失;在第15天髓鞘脫失最為嚴(yán)重,可見(jiàn)大片或融合的脫髓鞘灶,甚至軸索

6、染色亦缺失,呈空泡樣改變;第18、24天髓鞘脫失緩解;第30天偶有單個(gè)脫髓鞘灶。4.各組大鼠側(cè)腦室周?chē)鶯INGO-1表達(dá)的免疫組化結(jié)果:對(duì)照組各亞組大鼠側(cè)腦室周?chē)鶯INGO-1表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)。與對(duì)照組同期各亞組比較:EAE組第11天亞組(P<0.05)、第15天亞組(P<0.01)LINGO-1表達(dá)水平下降;EAE組第18天亞組LINGO-1表達(dá)水平有輕微上升,但差異無(wú)顯著性(P>0.05);EAE組第24、30天亞組L

7、INGO-1表達(dá)水平有上調(diào)(P<0.01)。EAE組內(nèi)比較:隨著病程的延長(zhǎng),第15天亞組較第11天亞組LINGO-1表達(dá)水平降低(P<0.01);第18天亞組較第15天亞組LINGO-1表達(dá)水平有所上調(diào)(P<0.01);第24天亞組比第18天亞組LINGO-1表達(dá)水平又有上升(P<0.01);第30天亞組比第24天亞組LINGO-1表達(dá)水平下降(P<0.01)。
　　結(jié)論：LINGO-1在EAE大鼠側(cè)腦室周?chē)磉_(dá)呈動(dòng)態(tài)變化。LIN