實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠側(cè)腦室周圍Nogo-A和NgR蛋白表達(dá)變化.pdf

1、目的: 觀察實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）大鼠側(cè)腦室周圍髓鞘相關(guān)軸突再生抑制因子Nogo-A以及其受體NgR表達(dá)的時程變化，探討Nogo-A和NgR在EAE發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法: 用豚鼠脊髓勻漿（guinea pig spinal cord homogenate，GPSCH）、完全福氏佐劑（complete freund'

2、s adjuvant，CFA）、百日咳疫苗原漿液（pertussis vaccine，PV）致敏雌性Wistar大鼠，建立EAE模型。65只雌性Wistar大鼠隨機分成3組：正常對照組5只，完全弗氏佐劑組30只，EAE組（GPSCH+CFA+PV）30只，各組再隨機分成6個亞組，每個亞組5只。正常對照組在第11天全部處死，EAE組和CFA組的6個亞組分別在抗原免疫后的第11天、第13天、第15天、第18天、第24天和第30天處死。觀察各

3、組大鼠發(fā)病、體重變化情況并進行神經(jīng)功能評分。取大鼠腦組織切片進行檢測：用蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色后在光鏡下進行炎性病灶計數(shù)；堅牢藍(lán)-焦油紫染色法光鏡下觀察脫髓鞘情況。免疫組化方法和陽性細(xì)胞數(shù)計數(shù)檢測各組大鼠側(cè)腦室周圍組織內(nèi)Nogo-A和NgR的表達(dá)情況。對Nogo-A和NgR與神經(jīng)功能評分、炎性病灶數(shù)進行相關(guān)性分析。統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS16.0軟件包進行。 結(jié)果: 1.各組大鼠EAE

4、的發(fā)病結(jié)果：正常對照組和完全弗氏佐劑組無大鼠發(fā)病。EAE組共有26只大鼠發(fā)病發(fā)病率為86.66％。 2.各組大鼠神經(jīng)功能評分、體重?fù)p失、CNS的HE和LFB染色病理結(jié)果：正常組、CFA組大鼠神經(jīng)功能評分為O分，CFA組無體重?fù)p失。相對于CFA組，EAE組體重?fù)p失隨病情的加重而增加，在第15天體重?fù)p失最明顯。EAE組大鼠神經(jīng)功能評分于第15天最為明顯。正常對照組和CFA組大鼠側(cè)腦室周圍白質(zhì)HE染色無炎性病灶。EAE組在第11天時C

5、NS已出現(xiàn)炎性病灶，第13天、15天時炎性病灶范圍擴大、數(shù)目增加，此時EAE組LFB染色可見典型的脫髓鞘改變。第24天時炎性病灶減少、程度減輕，第30天已接近正常組。 3.各組大鼠側(cè)腦室周圍白質(zhì)的Nogo-A免疫組化及圖像分析結(jié)果：與正常對照組和同期CFA組比較，EAE組第11天亞組側(cè)腦室周圍Nogo-A的表達(dá)水平升高（P<0.05）、第13組反而下降（P<0.05）、15天、18天、24天、30天亞組組表達(dá)升高（P<0.05）

6、，并于24天達(dá)到峰值。CFA各亞組側(cè)腦室周圍Nogo-A的表達(dá)水平與正常組相比差異無顯著性（p>0.05），CFA各亞組Nogo-A的表達(dá)水平組間比較差異無顯著性（p>0.05）。 4.各組大鼠側(cè)腦室周圍白質(zhì)的NgR免疫組化及圖像分析結(jié)果：與正常對照組和同期CFA組側(cè)腦室周圍NgR的表達(dá)水平相比，EAE組第11天亞組表達(dá)水平無改變（p>0.05），第13天、15天、18天亞組表達(dá)水平升高（P<0.05），第24天和30天亞組表達(dá)

7、水平回落，差異無顯著性（p>0.05）。CFA各亞組側(cè)腦室周圍NgR的表達(dá)水平與正常組相比差異無顯著性（p>0.05），CFA各亞組NgR的表達(dá)水平組間比較差異無顯著性（p>0.05） 5.Nogo-A的表達(dá)水平與NgR的表達(dá)水平、神經(jīng)功能評分、側(cè)腦室周圍炎性病灶數(shù)無相關(guān)性，NgR的表達(dá)與神經(jīng)功能評分正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.43）、與側(cè)腦室周圍炎性病灶數(shù)正相關(guān)（相關(guān)系數(shù)0.437）。 結(jié)論: 1.Nogo-A升高貫穿