蘆薈大黃素體外抗炎作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:本課題通過LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞，建立體外炎癥細(xì)胞模型，觀察蘆薈大黃素對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7的細(xì)胞釋放NO、TNF-a和IL-1β的影響，以及蘆薈大黃素對(duì)ERK、iNOS蛋白表達(dá)和NF-κB信號(hào)通路下游基因表達(dá)的影響，探討蘆薈大黃素抗內(nèi)毒素作用及其機(jī)制。
　　方法:采用MTT法，制備RAW264.7細(xì)胞生長曲線;采用Griess法，檢測(cè)蘆薈大黃素對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO量;采用ELISA，檢

2、測(cè)蘆薈大黃素對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放的TNF-a和IL-1β量;采用Western blot法，研究蘆薈大黃素對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞ERK、iNOS蛋白表達(dá)和磷酸化水平的影響;采用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染技術(shù)，研究蘆薈大黃素對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7 NF-κB信號(hào)通路下游基因表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:1.40μM、2OμM、15μM、10μM、5μM、0.1μM的蘆薈大黃素對(duì)RAW264.7細(xì)胞增殖沒有顯著的影響。

3、r>　　2.陽性藥10μM NF-κB抑制劑BAY-11-7082以及20μM蘆薈大黃素、20μM大黃酸、40μM大黃素對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO的抑制作用明顯，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而8μM大黃素甲醚與8μM大黃酚對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO的抑制作用不明顯，與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3.和模型組相比，20μM、10μM的蘆薈大黃素以及陽性藥BAY11-7082都能

4、夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO、TNF-a、IL-1β，并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，而5μM的蘆薈大黃素對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放NO、TNF-a、IL-1β抑制作用不明顯(P＞0.05)。
　　4.在1μg/ml的LPS刺激下，RAW264.7細(xì)胞中iNOS蛋白表達(dá)、ERK蛋白磷酸化水平水平顯著提高。而在蘆薈大黃素存在的情況下，LPS刺激后的iNOS蛋白表達(dá)、ERK磷酸化水平顯著降低。本實(shí)驗(yàn)

5、結(jié)果說明蘆薈大黃素能夠抑制由LPS引起的細(xì)胞內(nèi)iNOS蛋白表達(dá)、ERK磷酸化水平。
　　5.TNF-a能刺激HELA細(xì)胞表達(dá)更多的NF-κB，模型組與空白組有顯著性差異(P＜0.01)，陽性藥BAY11-7082能顯著抑制TNF-a刺激的HELA細(xì)胞活化NF-κB，并且與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。但不同濃度的蘆薈大黃素不能抑制TNF-a刺激的HELA細(xì)胞表達(dá)NF-κβ。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)蘆薈大黃素能