VVC患者臨床分離白念珠菌鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1、Mrr1對(duì)外排泵基因MDR1的作用.pdf

1、外陰陰道念珠菌?。╒ulvovaginal Candida，VVC）是一種臨床上主要累及外陰部和陰道內(nèi)的，一般是由念珠菌所感染機(jī)體導(dǎo)致的疾病，它的癥狀主要為生殖器部位的瘙癢，患者的白帶增多表現(xiàn)為豆腐或凝乳狀，日常生活中大約有75％的女性在一生中大約會(huì)罹患一次VVC。VVC在實(shí)際臨床中一般容易治療，但它有較高的發(fā)病率，同時(shí)治療后數(shù)月或數(shù)年在女性身體免疫力低下時(shí)又會(huì)復(fù)發(fā)，所以，它對(duì)世界上各個(gè)國家和地區(qū)女性的身心健康構(gòu)成了巨大的威脅。當(dāng)前，各

2、地區(qū)醫(yī)院在臨床上治療VVC主要選用的藥物大部分是唑類，首選氟康唑(FCA)，由于VVC患者長(zhǎng)期不合理的用藥和患者自身免疫功能的低下等諸多原因?qū)е铝四瓦蝾愃幬锞甑某霈F(xiàn)，且耐藥現(xiàn)象日趨嚴(yán)重。所以，目前對(duì)于研究VVC中白念珠菌對(duì)唑類藥物的耐藥非常緊迫，這一研究結(jié)果對(duì)于在臨床上指導(dǎo)VVC的治療具有重要意義。
　　目的:
　　1.了解當(dāng)?shù)豓VC患者陰道分泌物中各種類型念珠菌的主要分布情況和所分離出來的菌株對(duì)常用唑類藥物的敏感性；

3、r>　　2.探討在本地區(qū)VVC患者中白念珠菌中鋅簇轉(zhuǎn)錄因子Cap1、Mrr1和外排泵基因MDR1的表達(dá)水平與臨床上經(jīng)常使用的藥物氟康唑的耐藥關(guān)系，同時(shí)分析三種因子之間有無協(xié)同耐藥關(guān)系。
　　方法:
　　收集從2014年3月到2014年11月，山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚性病科，疑似VVC患者的潔凈陰道分泌物標(biāo)本總共約256例，下一步通過KOH的顯微鏡的檢查、沙氏培養(yǎng)基、API20CAUX陽性標(biāo)本的鑒定系統(tǒng)，對(duì)所得臨床標(biāo)本進(jìn)行真菌

4、的直接鏡檢和培養(yǎng)，一共獲得了158株念珠菌。運(yùn)用ATB Fungus3酵母檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)量所分離出的念珠菌對(duì)常見5種唑類藥物的敏感性。對(duì)上述在實(shí)驗(yàn)室最初將從白念珠菌分離鑒定出來的68株白念珠菌分別同時(shí)提取它們各自基因組的DNA，采用更為精確的分子生物學(xué)PCR方法來進(jìn)一步檢測(cè)以上菌株是否確定為白念珠菌。隨機(jī)選取上述實(shí)驗(yàn)得到的白念珠菌50株，分別得到對(duì)FCA敏感的和對(duì)FCA耐藥的25株。下一步主要是提取每個(gè)菌株的總RNA，進(jìn)行嚴(yán)格的逆轉(zhuǎn)錄進(jìn)而合

5、成cDNA， FQ-RT-PCR方法得到Mrr1、Cap1、MDR1等基因的具體表達(dá)量，同時(shí)分析它們的表達(dá)水平與FCA的耐藥關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.一共收集了VVC患者潔凈的陰道分泌物256份，真菌培養(yǎng)結(jié)果是陽性的總共有158例，陽性率為61.7％。其中白念珠菌具體是68株（43.0％），熱帶念珠菌具體是31株（19.6％），光滑念珠菌具體是22株（13.9％），近平滑念珠菌具體是8株（5.1％），克柔念珠菌具體是5株（

6、3.2％），其它的菌主要是24株（15.2％）。
　　2.對(duì)1中的68株各種方法鑒定后的白念珠菌藥物的敏感性的結(jié)果為：白念珠菌對(duì)5-FC、AMB都很敏感，對(duì)ITR、FCA和VRC的耐藥性分別為36.7%、38.71%和42.65%。存在共同耐藥現(xiàn)象。
　　3.檢測(cè)各個(gè)基因的mRNA表達(dá)水平在白念珠菌耐FCA耐藥菌株和敏感菌株中的Mrr1、Cap1、MDR1的表達(dá)量。白念珠菌的耐藥組中的Cap1、MDR1分子的表達(dá)比敏感組(P

7、<0.05)的表達(dá)高得多，所得結(jié)果：在耐藥組中Cap1基因的表達(dá)量為敏感組基因的表達(dá)量的5.12倍，耐藥組Mrr1基因的表達(dá)量是敏感組基因的表達(dá)量的1.67倍，Cap1與MDR1呈明顯的正相關(guān)，而Mrr1與MDR1沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)上表達(dá)的差異。
　　結(jié)論:
　　1.白念珠菌株仍為本地區(qū)VVC感染的主要致病真菌，對(duì)氟康唑敏感株較多，可作為臨床治療VVC一線用藥。
　　2.白念珠菌中Cap1與MDR1的mRNA表達(dá)量都較高，它們