脂多糖誘導(dǎo)激活原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Notch信號(hào)通路的研究.pdf

1、背景：動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis, AS）是嚴(yán)重危害人類健康的血管疾病，以AS為基礎(chǔ)的心腦血管病目前發(fā)病率和死亡率最高。AS的病因涉及多種危險(xiǎn)因素和疾病，探索AS的發(fā)病機(jī)理，尋求新的干預(yù)方法是我們面臨的重要挑戰(zhàn)。
　　 Notch信號(hào)系統(tǒng)是一種短距離的信號(hào)傳導(dǎo)通路，通過細(xì)胞與細(xì)胞的相互接觸介導(dǎo)信號(hào)傳遞，在細(xì)胞的分化、增殖和凋亡中有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)Notch信號(hào)在免疫細(xì)胞特別是抗原遞呈細(xì)胞中具有重要作用。激活狀

2、態(tài)的人巨噬細(xì)胞中Notch配基表達(dá)升高，參與巨噬細(xì)胞激活。成熟的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)Notch受體和配基。單核巨噬細(xì)胞粘附到內(nèi)皮細(xì)胞表面是AS發(fā)病過程的重要環(huán)節(jié)。因此明確炎癥狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞Notch信號(hào)是否被激活，以及Notch信號(hào)作為接觸轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要信號(hào)通路是否參與其中具有重要意義。
　　 脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性菌表面的重要結(jié)構(gòu)，對(duì)免疫和炎癥系統(tǒng)的細(xì)胞具有強(qiáng)大的激活能力，是經(jīng)典的炎癥刺激物，廣泛用于炎癥相關(guān)疾病的研究中。TLRs（

3、Toll-like receptors，TLRs）是關(guān)鍵的模式識(shí)別受體，基因錯(cuò)義突變研究確定了TLR4是LPS的受體。LPS能誘導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)TLR4。TLRs識(shí)別配基后，激活炎癥細(xì)胞產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子。研究表明TLR信號(hào)通路的激活與心血管受損緊密相關(guān)。
　　 本課題中，我們以體外培養(yǎng)的原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為研究對(duì)象，以脂多糖作為炎癥刺激，擬從TLRs信號(hào)通路激活的內(nèi)皮細(xì)胞炎癥模型中，探討人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞TLRs信號(hào)通路與Not

4、ch信號(hào)通路的相互作用，為進(jìn)一步研究動(dòng)脈粥樣硬化的免疫機(jī)制提供新靶點(diǎn)。
　　 目的：探討原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Toll樣受體信號(hào)通路與Notch信號(hào)通路的相互作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，加入脂多糖或溶媒孵育誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，以實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)Toll樣受體信號(hào)通路下游炎癥因子IL-6、TNF-α，Notch信號(hào)通路靶基因HES1，Notch膜受體mRNA表達(dá)。予Notch信號(hào)通路阻斷劑DAPT孵

5、育16小時(shí)，再予脂多糖或溶媒刺激觀察HES1、IL-6、TNF-αmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 ① LPS上調(diào)TLR信號(hào)通路下游炎癥因子IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)；
　　 ② LPS誘導(dǎo)Notch信號(hào)通路靶基因HES1表達(dá)；
　　 ③ DAPT預(yù)處理抑制LPS誘導(dǎo)HES1 mRNA表達(dá)；
　　 ④ LPS誘導(dǎo)膜受體Notch-1、Notch2、Notch3 mRNA 表達(dá)；
　

6、　 ⑤阻斷Notch信號(hào)通路明顯上調(diào)IL-6、TNF-α mRNA 表達(dá)。
　　 結(jié)論：證實(shí)LPS誘導(dǎo)激活原代培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上TLR信號(hào)通路；首次在內(nèi)皮細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)激活TLR信號(hào)通路同時(shí)激活Notch信號(hào)通路；發(fā)現(xiàn)LPS對(duì)HES1的誘導(dǎo)表達(dá)依賴經(jīng)典Notch信號(hào)通路，但不需要Notch受體蛋白的新合成。發(fā)現(xiàn)TLR信號(hào)通路誘導(dǎo)Notch信號(hào)通路膜受體mRNA 表達(dá)。發(fā)現(xiàn)阻斷Notch信號(hào)通路上調(diào)TLR信號(hào)通路下游炎癥因子表