脂多糖誘導激活原代人臍靜脈內皮細胞Notch信號通路的研究.pdf

1、背景：動脈粥樣硬化（atherosclerosis, AS）是嚴重危害人類健康的血管疾病，以AS為基礎的心腦血管病目前發(fā)病率和死亡率最高。AS的病因涉及多種危險因素和疾病，探索AS的發(fā)病機理，尋求新的干預方法是我們面臨的重要挑戰(zhàn)。
　　 Notch信號系統(tǒng)是一種短距離的信號傳導通路，通過細胞與細胞的相互接觸介導信號傳遞，在細胞的分化、增殖和凋亡中有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)Notch信號在免疫細胞特別是抗原遞呈細胞中具有重要作用。激活狀

2、態(tài)的人巨噬細胞中Notch配基表達升高，參與巨噬細胞激活。成熟的內皮細胞表達Notch受體和配基。單核巨噬細胞粘附到內皮細胞表面是AS發(fā)病過程的重要環(huán)節(jié)。因此明確炎癥狀態(tài)下內皮細胞Notch信號是否被激活，以及Notch信號作為接觸轉導的重要信號通路是否參與其中具有重要意義。
　　 脂多糖（LPS）是革蘭氏陰性菌表面的重要結構，對免疫和炎癥系統(tǒng)的細胞具有強大的激活能力，是經(jīng)典的炎癥刺激物，廣泛用于炎癥相關疾病的研究中。TLRs（

3、Toll-like receptors，TLRs）是關鍵的模式識別受體，基因錯義突變研究確定了TLR4是LPS的受體。LPS能誘導人內皮細胞表達TLR4。TLRs識別配基后，激活炎癥細胞產(chǎn)生促炎細胞因子。研究表明TLR信號通路的激活與心血管受損緊密相關。
　　 本課題中，我們以體外培養(yǎng)的原代人臍靜脈內皮細胞為研究對象，以脂多糖作為炎癥刺激，擬從TLRs信號通路激活的內皮細胞炎癥模型中，探討人臍靜脈內皮細胞TLRs信號通路與Not

4、ch信號通路的相互作用，為進一步研究動脈粥樣硬化的免疫機制提供新靶點。
　　 目的：探討原代人臍靜脈內皮細胞Toll樣受體信號通路與Notch信號通路的相互作用。
　　 方法：體外培養(yǎng)原代人臍靜脈內皮細胞，加入脂多糖或溶媒孵育誘導炎癥反應，以實時熒光定量PCR方法檢測Toll樣受體信號通路下游炎癥因子IL-6、TNF-α，Notch信號通路靶基因HES1，Notch膜受體mRNA表達。予Notch信號通路阻斷劑DAPT孵

5、育16小時，再予脂多糖或溶媒刺激觀察HES1、IL-6、TNF-αmRNA的表達。
　　 結果：
　　 ① LPS上調TLR信號通路下游炎癥因子IL-6、TNF-αmRNA表達；
　　 ② LPS誘導Notch信號通路靶基因HES1表達；
　　 ③ DAPT預處理抑制LPS誘導HES1 mRNA表達；
　　 ④ LPS誘導膜受體Notch-1、Notch2、Notch3 mRNA 表達；
　

6、　 ⑤阻斷Notch信號通路明顯上調IL-6、TNF-α mRNA 表達。
　　 結論：證實LPS誘導激活原代培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞上TLR信號通路；首次在內皮細胞上發(fā)現(xiàn)激活TLR信號通路同時激活Notch信號通路；發(fā)現(xiàn)LPS對HES1的誘導表達依賴經(jīng)典Notch信號通路，但不需要Notch受體蛋白的新合成。發(fā)現(xiàn)TLR信號通路誘導Notch信號通路膜受體mRNA 表達。發(fā)現(xiàn)阻斷Notch信號通路上調TLR信號通路下游炎癥因子表