小檗堿對阿霉素所致心肌細胞損傷的保護作用研究.pdf

1、目的：阿霉素(adriamycin)是從松鏈絲菌淺灰色變株中提取的一種蔥環(huán)類抗生素，具有廣譜、高效的抗腫瘤作用，但是其在用藥過程中引起不可逆轉的心肌損傷,嚴重限制了其應用范圍。阿霉素引起心肌損傷的具體機制目前尚不明確，氧化應激、凋亡、線粒體損傷及細胞內鈣超載均有報導，可能是多因素共同作用的結果。既往研究表明其因素之一是阿霉素可導致細胞內ROS生成增加，而ROS可引起心肌細胞內DNA氧化損傷，使細胞出現(xiàn)染色體畸變最終導致相應細胞凋亡甚至壞

2、死。因此如何提高腫瘤治療效果，擴大阿霉素應用范圍，開發(fā)心臟保護劑來抵抗阿霉素引起的心肌損傷是目前亟待解決的問題。
　　小檗堿主要提取于中藥黃連，是一種異喹啉類生物堿，具有清熱、解毒、瀉火、降血糖、降血脂以及調節(jié)免疫等功效。小檗堿對正常細胞毒性作用不明顯，但可以抑制腫瘤細胞的生長，且可減輕阿霉素引起的心肌損傷，但具體機制尚不清楚。因此本文采用多種檢測技術進一步觀察小檗堿是否可減輕阿霉素對人源AC16心肌細胞的損傷作用，并在氧化應激和

3、DNA水平探討其產生保護作用的可能機制。該研究可為臨床應用小檗堿提供基礎研究資料。
　　方法：
　　1通過MTT比色法測定人源AC16心肌細胞存活率，觀察不同濃度阿霉素對心肌細胞的毒性大小，確定阿霉素的適當濃度，從而建立其致心肌細胞損傷的模型。
　　2隨機將人源AC16心肌細胞分為六組：空白對照組、阿霉素組、小檗堿組（10μmol/L）、低濃度（1μmol/L）小檗堿+阿霉素組、中濃度（5μmol/L）小檗堿+阿霉素組

4、及高濃度（10μmol/L）小檗堿+阿霉素組。給藥后在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。小檗堿+阿霉素組均采用給予小檗堿半小時后給予阿霉素。
　　3應用流式細胞儀測定細胞中ROS含量、彗星實驗測定細胞DNA的損傷情況以及使用RT-PCR技術檢測DNA修復酶X線修復交叉互補組1（XRCC1）及X線修復交叉互補組3（XRCC3）的表達情況，觀察對比各組間有無差異。
　　結果：
　　1通過濃度梯度設計，依據心肌細胞存

5、活率篩選阿霉素對心肌細胞作用最佳造模濃度，結果顯示2μmol/L為合適濃度，心肌細胞存活率明顯下降至約75%。
　　2阿霉素組心肌細胞存活率明顯低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；小檗堿組與空白對照組比較心肌細胞存活率無明顯差異（P＞0.05）；與阿霉素組比較，低、中濃度小檗堿+阿霉素組細胞存活率升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），高濃度小檗堿+阿霉素組細胞存活率明顯升高且有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。

6、　　3阿霉素組中ROS含量較空白對照組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而小檗堿組ROS含量與空白對照組無明顯差異（P＞0.05）；與阿霉素組比較，低、中濃度小檗堿均能降低阿霉素引起的ROS含量升高程度，但不明顯（P＞0.05），高濃度小檗堿+阿霉素組ROS含量明顯降低，且差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　4阿霉素組與空白對照組比較心肌細胞DNA損傷明顯（P＜0.05），小檗堿組較空白對照組無明顯細胞DNA損傷（P

7、＞0.05）；與阿霉素組相比，低濃度小檗堿可不同程度的改善阿霉素的DNA損傷情況，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），中、高濃度小檗堿可明顯改善阿霉素的DNA損傷，差異顯著（P＜0.05）。
　　5與空白對照組相比較，小檗堿組的DNA修復酶表達無明顯差異（P＞0.05），而阿霉素組表達明顯減少（P＜0.05）。與阿霉素組相比，低濃度小檗堿組DNA修復酶表達升高，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），中、高濃度小檗堿+阿霉素組DNA修