缺血性認知功能障礙大鼠腦內(nèi)α4β2 nAChRs和炎癥因子的表達及煙堿對其影響的研究.pdf

1、目的：探討缺血性認知功能障礙大鼠腦內(nèi)α4β2 nAChRs和炎癥因子的表達及煙堿對其影響的實驗研究。
　　方法：應用腦立體定位儀，將內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)注射至大鼠左側(cè)丘腦區(qū)，建立局灶性缺血性認知功能障礙模型。術(shù)后分別給予煙堿(1.5mg/kg/d)、阻斷劑二氫-β-刺桐定（Dihydro-β-erythroidine，DHβE）(3 mg/kg/d)、煙堿(1.5 mg/kg/d)+DHβE(3 mg/

2、kg/d)及生理鹽水腹腔注射，分別為煙堿組、DHβE組、煙堿+DHβE組，缺血組及假手術(shù)組大鼠，連續(xù)干預9天。于術(shù)后第4天進行Morris水迷宮實驗檢測大鼠的認知功能，結(jié)束后立即進行2-[18F]-A-85380Micro PET顯像，評估不同大腦區(qū)域的nAChRs受體數(shù)量的變化。利用Real-timePCR技術(shù)檢測煙堿對各組大鼠丘腦α4β2 nAChRs受體亞基及炎癥因子表達的影響。
　　結(jié)果：前期實驗表明給予不同劑量煙堿干預丘

3、腦缺血大鼠后，劑量為1.5mg/kg/d大鼠認知功能改善效果最佳。Morris水迷宮定向航行試驗中，所有組別大鼠的逃避潛伏期隨著實驗天數(shù)的增加均有縮短，在第4天時逃避潛伏期分別為16.31±6.95（煙堿組），53.78±44.23（DHβE組），51.75±44.50（煙堿+DHβE組），69.03±47.24（缺血組），8.40±2.12（假手術(shù)組）。缺血組大鼠尋找平臺的逃避潛伏期明顯長于假手術(shù)大鼠，煙堿組大鼠的空間學習和記憶能力與

4、缺血組大鼠相比明顯提高，逃避潛伏期的差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);給予阻斷劑DHβE后，煙堿對缺血大鼠認知功能障礙的改善功能被阻斷，其與缺血大鼠比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。Morris水迷宮空間探索實驗中，煙堿組大鼠的記憶能力與缺血組大鼠相比有明顯改善，撤掉平臺后，大鼠按照之前學習記憶尋找平臺，記錄穿過原來放置平臺的次數(shù)和穿過原平臺所在象限的時間，其中穿越平臺的次數(shù)煙堿組大鼠、DHβE組大鼠、煙堿+DHβE組大鼠、缺血組大

5、鼠及假手術(shù)組大鼠分別為5.60±1.81、2.20±1.09，3.0±1.58、0.60±0.54、4.00±0.71。缺血組大鼠與煙堿組大鼠有統(tǒng)計學差別（P＜0.05）;在靶象限持續(xù)時間，煙堿組大鼠與缺血組大鼠有顯著統(tǒng)計學差別(P＜0.05);煙堿組經(jīng)DHβE干預后與缺血組比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。大鼠腦Micro PET顯像，在注射2-[18F]-A-85380120 min后進行顯像，缺血組大鼠的SUVave左丘腦/SUV

6、ave小腦、SUVave全腦/SUVave小、腦均低于假手術(shù)大鼠，差異有統(tǒng)計學意義，說明丘腦缺血導致腦內(nèi)α4β2 nAChRs降低。煙堿治療組大鼠的SUVave左丘腦/SUVave小腦、SUVave全腦/SUVave小腦均高于缺血組大鼠，而DHβE干預組大鼠的SUVave左丘腦/SUVave小腦、SUVave全腦/SUVave小腦與缺血組大鼠無明顯差異，煙堿組大鼠、DHβE組大鼠、煙堿+DHβE組大鼠、缺血組大鼠、假手術(shù)組大鼠SUVav

7、e左丘腦/SUVave小腦分別為2.98±0.06、2.49±0.15、2.24±0.31、2.11±0.17、2.65±0.19;SUVave全腦/SUVave小腦分別為1.85±0.09、1.67±0.08、1.67±0.08、1.49±0.04、1.83±0.18。Real-time PCR實驗結(jié)果表明，α4β2 nAChRs受體的兩個亞基α4nAChR、β2nAChR mRNA在左側(cè)丘腦缺血后較假手術(shù)組大鼠比較均降低（0.61±

8、0.07;0.50±0.13），TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表達較假手術(shù)組大鼠比較均升高(1.35±0.06;1.86±0.11;1.86±0.24)。說明大鼠丘腦缺血后腦內(nèi)α4β2 nAChRs受體降低而炎癥反應增強。經(jīng)煙堿干預后α4 nAChR、β2 nAChR mRNA的表達與缺血組比較均顯著升高(P＜0.05)，TNF-α、IL-1β、 IL-6 mRNA表達均較缺血組大鼠減少（P＜0.05）。而給予DHβE干預后