長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00638在食管鱗癌中的功能和作用機(jī)制研究.pdf

1、食管癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)男性中的發(fā)病率排在第三位，女性中排在第五位。我國(guó)食管癌的病理類(lèi)型多為食管鱗癌，目前對(duì)于食管鱗癌的治療手段有效，病人預(yù)后差，五年生存率低。因此研究食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，為食管鱗癌的臨床診斷和治療提供分子標(biāo)志物或藥物靶點(diǎn)顯得尤為重要。
　　課題組前期通過(guò)對(duì)食管鱗癌組織樣本進(jìn)行全基因組測(cè)序和比較基因組雜交分析，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)高頻擴(kuò)增區(qū)域14q32.2-32.33，且此區(qū)域的擴(kuò)增與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切

2、相關(guān)。為了研究長(zhǎng)鏈非編碼RNA在食管鱗癌中的功能和作用機(jī)制，我們?cè)诖藬U(kuò)增區(qū)域篩選出一個(gè)在食管鱗癌細(xì)胞中表達(dá)，并且其表達(dá)與DNA擴(kuò)增相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA，linc00638。通過(guò)RACE實(shí)驗(yàn)、Northern blot實(shí)驗(yàn)以及PCR實(shí)驗(yàn)，我們確定了linc00638的全長(zhǎng)核酸序列。在對(duì)食管鱗癌組織標(biāo)本及其配對(duì)癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行RNA原位雜交實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)，linc00638的細(xì)胞定位發(fā)生了變化:在166例癌旁組織中，linc00638定位于細(xì)

3、胞核，而在84例癌組織中，linc00638定位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿。Linc00638核漿均有分布的食管鱗癌組織樣本對(duì)應(yīng)著更高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。
　　為了探究linc00638定位改變的分子機(jī)制，我們采用RNA pull-down實(shí)驗(yàn)聯(lián)合質(zhì)譜分析，發(fā)現(xiàn)PTB可以和linc00638結(jié)合，并調(diào)控linc00638的表達(dá)和細(xì)胞定位。
　　體外的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明linc00638可以促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞的增殖、克隆形成、侵襲遷移，促進(jìn)淋巴內(nèi)皮

4、細(xì)胞的遷移和成管。體內(nèi)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)linc00638可以促進(jìn)食管鱗癌細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明linc00638具有促癌作用。
　　分子機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，位于細(xì)胞漿的linc00638可以直接與VEGF-C mRNA結(jié)合，并增加mRNA的穩(wěn)定性，促進(jìn)VEGF-C的表達(dá);此外，linc00638還可以與miR-216b相互作用，調(diào)控miR-216b靶基因KRAS的表達(dá)。
　　以上研究表明長(zhǎng)鏈非編碼RNA