DNA雙鏈損傷修復(fù)酶Ku70在高糖環(huán)境加重布比卡因神經(jīng)毒性損傷中的作用研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開討論：
　　第一部分 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
　　目的：探討高糖環(huán)境對(duì)布比卡因作用下SH-SY5Y細(xì)胞神經(jīng)毒性、修復(fù)酶Ku70表達(dá)的影響。
　　方法：用正常和含葡萄糖25、50、100 mM的培養(yǎng)基處理SH-SY5Y細(xì)胞1、3、7d后測(cè)定蛋白γ-H2AX和Ku70的表達(dá);確定高糖的作用時(shí)間和作用濃度。檢測(cè)布比卡因濃度梯度下細(xì)胞活力。建立布比卡因毒性損傷的細(xì)胞模型。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分為對(duì)照組、高糖組、布比卡因組、

2、高糖+布比卡因組。檢測(cè)Ku70 mRNA、修復(fù)酶Ku70、凋亡蛋白cleaved caspase-3的表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)ROS含量、彗星尾距值、凋亡細(xì)胞比例。構(gòu)建Ku70過表達(dá)細(xì)胞株，驗(yàn)證Ku70在高糖環(huán)境加重布比卡因?qū)H-SY5Y細(xì)胞神經(jīng)毒性中的重要作用
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以(x)±s表示，SPSS20.0軟件分析，高糖或布比卡因單一因素作用后各組之間的比較采用單因素方差分析。高糖與布比卡因兩因素作用后各組之間的比較采用雙向方差

3、分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：SH-SY5Y細(xì)胞在布比卡因作用后Ku70表達(dá)增加。高糖環(huán)境抑制Ku70增加布比卡因作用后神經(jīng)細(xì)胞凋亡。過表達(dá)Ku70能減輕布比卡因的神經(jīng)毒性。
　　結(jié)論：高糖環(huán)境抑制Ku70的表達(dá)加劇布比卡因的神經(jīng)毒性，Ku70作為此損傷修復(fù)的關(guān)鍵酶。
　　第二部分 體內(nèi)大鼠實(shí)驗(yàn)
　　目的：觀察2型糖尿病大鼠對(duì)鞘內(nèi)注射布比卡因神經(jīng)毒性損傷及修復(fù)酶Ku70表達(dá)的影響
　　方

4、法：高糖、高脂飲食結(jié)合腹腔注射鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型。分組:對(duì)照組(Con)、糖尿病組(DM)、布比卡因組(Bup)、糖尿病+布比卡因組(DM+ Bup)。Bup和DM+ Bup組為鞘內(nèi)注射2.5％布比卡因30 ul，其它組注射等量生理鹽水。阻滯前和阻滯后6、12、24 h分別測(cè)定足底機(jī)械痛閾(PWMT)和熱痛反應(yīng)潛伏期(PWTL)的變化。注射24 h后取脊髓腰膨大部位測(cè)定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、Ku70與

5、cleaved caspase-3的表達(dá)。HE染色觀察脊髓損傷情況，Tunel法檢測(cè)凋亡細(xì)胞。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)量資料以(x)±s表示，SPSS20.0軟件分析，PWMT和PWTL值的比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析。MDA、SOD、Ku70、cleaved caspase-3、凋亡細(xì)胞比例的比較采用雙向方差分析，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：與注射前相比，Bup組注射24 h后PWMT

6、和PWTL無明顯變化(P=0.680;P=0.730)，DM+Bup組注射24 h后PWMT和PWTL明顯降低(P=0.000;P=0.000)。高糖環(huán)境與布比卡因皆可導(dǎo)致MDA增加和SOD活性抑制，且具有協(xié)同作用。與Bup組相比，DM+Bup組抑制修復(fù)酶Ku70的表達(dá)(t=4.475，P=0.000);同時(shí)增加cleaved caspase-3的表達(dá)和凋亡細(xì)胞的比例(t=-4.707，P=0.000; t=-20.041, P=0.0