DNA修復基因RAD51與MSH2合成致死作用研究——RI-1對MMR缺陷結直腸癌細胞的殺傷作用.pdf

1、目的:探究同源重組修復蛋白RAD51抑制劑RI-1對錯配修復基因MSH2缺陷結直腸癌細胞系的殺傷作用，并初步探索RAD51和MSH2二者之間的作用機制。
　　方法:采用Western blot法篩選MSH2差異表達的結直腸癌細胞系;MTT法檢測不同結直腸癌細胞系對RI-1(10、20、30、40或50μmol/L)的敏感性;同時構建針對MSH2基因的重組shRNA慢病毒表達載體并感染HT29細胞，并采用MTT法檢測MSH2敲降前后

2、的結直腸癌細胞系對RI-1(10、20、30、40或50μmol/L)的敏感性。最后，選取40μmol/L RI-1處理MSH2差異表達的結直腸癌細胞，流式細胞術法或TUNEL法分析細胞凋亡的變化;單細胞凝膠電泳實驗檢測細胞內DNA損傷情況;細胞免疫熒光實驗檢測細胞內γ-H2AX foci的形成。
　　結果:一、HCT8細胞MSH2表達水平明顯低于野生型HT29細胞，兩者對RI-1的敏感性不同，且HCT8細胞在RI-1作用下發(fā)生明

3、顯的細胞凋亡現(xiàn)象(P＜0.01);二、改變HT29細胞同源性MSH2表達水平，發(fā)現(xiàn)MSH2敲降的HT29shMSH2細胞與對照組相比對RI-1更敏感，且與對照組比較有明顯的細胞凋亡現(xiàn)象;三、HCT8細胞和HT29shMSH2細胞尾部DNA含量、尾長和尾距及細胞內γ-H2AX foci的形成數(shù)量與對照組相比，均有顯著性增加(P＜0.05)。
　　結論:RAD51抑制劑RI-1對MSH2缺陷結直腸癌細胞具有殺傷作用，這種殺傷作用可能是