FOXK1協(xié)同Rufy3促進(jìn)大腸癌侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　Rufy3蛋白參與細(xì)胞遷移、肌動蛋白細(xì)胞骨架的運(yùn)動、脂質(zhì)修飾、膜轉(zhuǎn)運(yùn)和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種細(xì)胞活動過程的調(diào)控。有研究表明，p21活化激酶（PAK1）可以促進(jìn)Rufy3的表達(dá)且協(xié)同Rufy3促進(jìn)胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移。另外，轉(zhuǎn)錄因子FOXK1參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞代謝和分化、組織修復(fù)等活動的調(diào)節(jié)，且在多種腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演癌基因的角色。本課題旨在明確FOXK1和Rufy3在大腸癌增殖、侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮的作用及可能的作用機(jī)制。<

2、br>　　方法:
　　1.免疫組織化學(xué)法檢測Rufy3和FOXK1在大腸癌組織和正常大腸黏膜組織中的表達(dá)，分析Rufy3和FOXK1的表達(dá)量之間的關(guān)系、與大腸癌病人的病例特征、預(yù)后的關(guān)系;
　　2.流式細(xì)胞周期技術(shù)、Western blot技術(shù)檢測Rufy3對大腸癌細(xì)胞周期的影響;
　　3.構(gòu)建Rufy3穩(wěn)定表達(dá)株、EdU染色、裸鼠皮下移植瘤模型檢測Rufy3對大腸癌增殖的影響;
　　4.Transwell侵襲實(shí)

3、驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、免疫熒光、羅丹明鬼筆環(huán)肽染色等實(shí)驗(yàn)檢測FOXK1和Rufy3對于大腸癌細(xì)胞上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化作用(EMT)、侵襲轉(zhuǎn)移功能的影響;5.運(yùn)用Smad2/3siRNA和Smad4siRNA、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究Rufy3作用于大腸癌細(xì)胞可能的TGF-β/Smad通路機(jī)制;6.構(gòu)建裸鼠原位肝轉(zhuǎn)移模型，免疫組化、qRT-PCR方法檢測E-cadherin、Vimentin的表達(dá)情況，研究在體內(nèi)，F(xiàn)OXK1和

4、Rufy3對大腸癌的作用。
　　結(jié)果:
　　1.Rufy3在大腸癌組織中的表達(dá)高于正常大腸粘膜組織，Rufy3高表達(dá)的大腸癌手術(shù)病人預(yù)后較低表達(dá)者差，Rufy3的表達(dá)與大腸癌的TNM分期、分化程度、AJCC分期、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性;
　　2.敲低Rufy3，處于G0/G1期的大腸癌細(xì)胞增多，G2/M細(xì)胞減少，相關(guān)周期蛋白表達(dá)發(fā)生改變;
　　3.過表達(dá)Rufy3組的裸鼠皮下瘤較對照組生長快，Ki67

5、表達(dá)量高;
　　4.過表達(dá)Rufy3促進(jìn)Vimentin的表達(dá)，抑制E-cadherin的表達(dá)，加快劃痕愈合速度，增強(qiáng)大腸癌細(xì)胞穿透Transwell膜的能力，敲低Rufy3減弱TGF-β1對于大腸癌細(xì)胞的EMT作用;
　　5.過表達(dá)Rufy3組的裸鼠較Vector組更多發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，且E-cadherin表達(dá)降低;
　　6.Rufy3和FOXK1在大腸癌細(xì)胞中存在相互作用，并在大腸癌組織中高表達(dá)，表達(dá)量高者較低者平均生

6、存時(shí)間短;
　　7.Rufy3穩(wěn)定表達(dá)株，敲低FOXK1后，Vimentin表達(dá)下降，E-cadherin表達(dá)上升，劃痕愈合速度減慢，穿透Transwell膜的能力減弱;
　　8.Rufy3組較Vector組、Rufy3-FOXK1-siRNA組裸鼠形成的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)多而大，Vimentin的表達(dá)量最高。
　　結(jié)論:
　　1.Rufy3在大腸癌組織中的表達(dá)高于正常大腸粘膜組織，Rufy3高表達(dá)負(fù)性影響大腸癌手術(shù)病人的