以藻酸鈣和透明質(zhì)酸為載體的可注射軟骨材料研究.pdf

1、目的:
　　可注射性組織工程軟骨是組織工程軟骨研究的新方向，具有損傷小、易操作等優(yōu)點(diǎn)[1]。藻酸鹽（alginate，ALG）凝膠和透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)是具有可塑性的組織工程細(xì)胞外支架，可用于研究可注射性組織工程軟骨的構(gòu)建[2-4]。肋軟骨和殘耳軟骨可通過體外擴(kuò)增作為組織工程軟骨的種子細(xì)胞[5]。本課題利用肋軟骨和殘耳軟骨兩種種子細(xì)胞，初步研究藻酸鈣凝膠和透明質(zhì)酸鈉作為可注射組織工程軟骨支架材料的可行性

2、，以及兩種種子細(xì)胞的差異。
　　方法:
　　1.收集先天性小耳畸形患者的肋軟骨和殘耳軟骨，分別體外分離培養(yǎng)肋軟骨細(xì)胞和殘耳軟骨細(xì)胞，將第3～4代軟骨細(xì)胞制成ALG-肋軟骨細(xì)胞凝珠（A組）和ALG-殘耳軟骨細(xì)胞凝珠（B組）(ALG濃度約為25g/L，細(xì)胞濃度為1.3×106/mL)。體外培養(yǎng)并通過倒置顯微鏡觀察，分別于1周、2周取材，行HE、Masson染色，評(píng)價(jià)兩種細(xì)胞在ALG凝珠中的增殖分化情況。
　　2.第二部分:

3、體外分離培養(yǎng)肋軟骨細(xì)胞（A組）和殘耳軟骨細(xì)胞（B組），收集第3～4代軟骨細(xì)胞.分別與HA、ALG混合注射于裸鼠（Nu/Nu，8w大，雄性）皮下。HA實(shí)驗(yàn)組行單純HA注射（潤百顏(@)，含透明質(zhì)酸23±0.5mg/mL;0.1mL/點(diǎn)，1點(diǎn)/鼠）、單純細(xì)胞懸液注射（0.1mL/點(diǎn)，2點(diǎn)/鼠）、HA-細(xì)胞懸液混合注射（0.1mL HA+0.1mL細(xì)胞懸液/點(diǎn)，2點(diǎn)/鼠），于注射后10天、30天、50天取材;ALG實(shí)驗(yàn)組行單純ALG凝膠（0.

4、1mL/點(diǎn)，2點(diǎn)/鼠）和ALG-軟骨細(xì)胞凝膠（0.1mL/點(diǎn)，4點(diǎn)/鼠）注射，于注射后30天取材。兩組取材后行HE、Masson染色，分析不同注射物和注射時(shí)間的注射部位真皮膠原密度及真皮厚度的變化。
　　結(jié)果:
　　第一部分:ALG-軟骨細(xì)胞凝珠在體外培養(yǎng)2周情況下可呈穩(wěn)定形態(tài)存在，凝珠內(nèi)軟骨細(xì)胞生長情況良好，可增殖、分化。
　　第二部分:1.所有時(shí)間點(diǎn)的HA-軟骨細(xì)胞混合注射組未觀察到軟骨樣組織形成，ALG-軟骨細(xì)胞

5、凝膠注射每個(gè)注射點(diǎn)均有軟骨樣組織形成，44％(16/36)的單純軟骨細(xì)胞懸液注射點(diǎn)形成軟骨樣組織，且最接近成熟軟骨，肋軟骨細(xì)胞組和殘耳軟骨細(xì)胞組無明顯差異;2.真皮膠原密度和厚度隨注射時(shí)間的增加而增加，不同注射物之間真皮厚度和真皮膠原密度的差異不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　本研究條件下
　　1.肋軟骨細(xì)胞和殘耳軟骨細(xì)胞作為軟骨組織工程種子細(xì)胞差異不大;
　　2.ALG凝膠適合作為可注射性支架材料用于組織工程