pH響應(yīng)性透明質(zhì)酸納米抗癌藥物載體的研究.pdf

1、本論文以組氨酸為疏水和pH相應(yīng)性基團(tuán),制備了透明質(zhì)酸-組氨酸化學(xué)耦合物(Hyaluronic acid-Histidine,HH),研究了這種兩親性分子在水溶液中的自組裝行為;以阿霉素(Adriamycin,ADR)為模型藥物制備了載藥的透明質(zhì)酸納米粒,研究了其在生理pH值7.4和酸性pH值6.0介質(zhì)中的藥物釋放效果;以人乳腺癌細(xì)胞系(human breast-cancer cell line,MCF-7)細(xì)胞為模型細(xì)胞,考察了載藥納米

2、粒的體外腫瘤細(xì)胞殺傷率,并探討了納米粒對內(nèi)涵體pH值的響應(yīng)性以及載藥納米粒在細(xì)胞內(nèi)釋放藥物的情況。
　　 利用EDC作為交聯(lián)劑,通過酰胺鍵共價連接組氨酸(Histidine,His)到透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)上制備透明質(zhì)酸-組氨酸耦合物化學(xué)耦合物,并改變組氨酸與透明質(zhì)酸的反應(yīng)摩爾比制成三種不同取代度的樣品(HH5、HH9、HH10)。通過酸堿滴定試驗(yàn)得到了透明質(zhì)酸-組氨酸耦合物的滴定曲線;利用核磁共振檢測

3、對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,證明了化學(xué)耦合成功,通過特征峰積分法得到產(chǎn)物的取代度;超聲制備HH納米粒,利用熒光光譜法測定納米粒的臨界聚集濃度(CAC),發(fā)現(xiàn)HH納米粒的CAC隨著取代度的增加而降低,三種樣品的CAC值分別是:0.098mg/ml、0.045mg/ml、0.039mg/ml;內(nèi)核的疏水性隨取代度的增加而提高;利用動態(tài)激光散射研究了納米粒的粒徑及其對介質(zhì)pH值的響應(yīng)性,在生理pH值7.4的緩沖溶液中,納米粒的粒徑隨取代度增加而降低,最

4、小為342nm,而當(dāng)介質(zhì)的pH值降為6.0時,透明質(zhì)酸-組氨酸聚集體的粒徑已經(jīng)超出納米級尺寸,而處于微米級的范圍內(nèi),該結(jié)果顯示出HH納米?？蓪λ嵝詐H值環(huán)境作出響應(yīng);利用透射電子顯微鏡和掃描電子顯微鏡技術(shù)對納米粒的形態(tài)進(jìn)行了表征,納米粒近似球形,形態(tài)完整。
　　 以阿霉素為模型藥物,利用疏水相互作用,以最初加藥量為10wt.％的比例,超聲制備了載藥HH9納米粒,其載藥量為:7.02％;包封率為:87.23％。探討了載藥硼9納米粒

5、的體外釋藥性能,在生理pH值7.4的介質(zhì)中,48小時內(nèi)累計釋藥百分率為27.98％,而當(dāng)介質(zhì)的pH值下降到內(nèi)涵體的酸性pH值6.0時,6小時內(nèi)的累計釋藥百分率就達(dá)到28.33％,48小時內(nèi)累計釋藥百分率高達(dá)50.97％。此結(jié)果顯示了載藥納米粒對pH值變化的響應(yīng)性,即當(dāng)pH值降到6.0時,組氨酸發(fā)生質(zhì)子化作用,納米粒內(nèi)部失去了疏水和親水作用力間的平衡,原本穩(wěn)定的核-殼結(jié)構(gòu)被破壞,極大地加速了阿霉素的釋放。
　　 本文還用MTT比色

6、的方法研究了HH9納米粒的細(xì)胞毒性和載阿霉素HH9納米粒對腫瘤細(xì)胞殺傷的有效性,并利用熒光顯微鏡檢測了細(xì)胞對載阿霉素HH9納米粒、熒光標(biāo)記的HH9納米粒和熒光標(biāo)記的載阿霉素HH9納米粒的內(nèi)吞作用以及載藥HH9納米粒向細(xì)胞質(zhì)中釋放阿霉素的情況。結(jié)果表明,空白HH9納米粒對MCF-7細(xì)胞無顯著毒性,孵育3天存活率仍在95％以上;與阿霉素注射劑相比,在1μg/ml、5μg/ml和10μg/ml時,HH9載藥納米粒顯示出更高的細(xì)胞毒性;熒光顯微