高壓氧聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對脊髓損傷大鼠炎癥反應(yīng)的影響及其相關(guān)機制的研究.pdf

1、目的:
　　脊髓損傷是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴(yán)重創(chuàng)傷之一，導(dǎo)致無法扭轉(zhuǎn)的并發(fā)癥和后遺癥，嚴(yán)重影響患者的日常生活能力。如何快速有效的治療脊髓損傷仍然是現(xiàn)在以及未來的研究熱點及難點。近年來干細(xì)胞移植治療脊髓損傷一直是基礎(chǔ)及臨床研究的方法之一，而高壓氧作為臨床上廣泛運用的治療方法之一，其治療脊髓損傷的機制仍然處于進一步研究過程中。大量文獻(xiàn)表明，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells，BMSCs)移

2、植可減輕脊髓繼發(fā)性損傷，降低炎癥浸潤，促進感覺及運動機能恢復(fù)。大量臨床研究證明，高壓氧療法(Hyperbaric Oxygen therapy，HBOT)可以提高缺血缺氧區(qū)域氧分壓及氧含量，抑制外周血中炎癥細(xì)胞活性，降低炎癥因子水平。本文通過對NF-κB炎癥信號通路的研究，探討在骨髓間充值干細(xì)胞移植基礎(chǔ)上應(yīng)用高壓氧療法對脊髓損傷大鼠損傷組織的作用，從而減輕炎癥反應(yīng)。
　　方法:
　　1.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞收集，培養(yǎng)及鑒定。

3、
　　2.分組:成年雄性SD大鼠，采用鉗夾法建立脊髓損傷模型，造模成功的大鼠分為假手術(shù)組（Sham組）、脊髓損傷組（SCI組）、脊髓損傷+骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞組（SCI+BMSCs組）、脊髓損傷+骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞+高壓氧組（SCI+BMSCs+HBO組）四個實驗組。
　　3.行為學(xué)評定:脊髓損傷術(shù)前1天及術(shù)后1、3、7、14天使用運動功能評分(BBB評分)觀察后肢運動功能恢復(fù)情況。
　　4.采用Western Blot法測

4、定脊髓組織NF-κB、IκB-α、TNF-α、IL-1β含量。
　　5.ELISA法測定脊髓組織TNF-α、IL-1β表達(dá)量。
　　6.免疫組化法測定脊髓組織石蠟切片NF-κB p65蛋白表達(dá)量。
　　7.脊髓組織石蠟切片HE染色。
　　結(jié)果:
　　第3代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長，多為長梭形，有細(xì)小突起，可成旋渦狀及放射狀生長。流式細(xì)胞儀檢測CD29及CD90高表達(dá)，分別為99.38％。99.48％;CD4

5、5低表達(dá)，為1.52％。脊髓損傷后損傷組織NF-κB、TNF-α及IL-1β蛋白的含量均明顯增加，IκB-α蛋白含量以及BBB評分均明顯減少;與Sham組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);BMSCs移植后，NF-κB、TNF-α及IL-1β蛋白的含量在第3天，第7天，第14天較SCI組明顯降低，IκB-α蛋白含量及BBB評分在第3天，第7天，第14天較SCI組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);高壓氧干預(yù)后，NF-κB、TN

6、F-α及IL-1β蛋白的含量在第3天，第7天，第14天較SCI+BMSCs組明顯降低，IκB-α蛋白含量及BBB評分在第3天，第7天，第14天較SCI+BMSCs組明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。蘇木精-伊紅染色(HE染色)假手術(shù)組脊髓未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤;SCI組有大量炎性細(xì)胞浸潤;SCI+BMSCs組炎癥反應(yīng)減輕;SCI+BMSCs+HBO組炎癥反應(yīng)進一步減輕，炎性細(xì)胞明顯減少。
　　結(jié)論:
　　脊髓損傷后損