NLRP3炎性體在HBV相關慢加急性肝衰竭及GalN-LPS誘導小鼠急性肝衰竭發(fā)病中的作用.pdf

1、背景:肝衰竭的發(fā)病機制與多種因素有關，其中免疫損傷與炎癥反應起至關重要的作用。NLRP3炎性體是一類位于胞內(nèi)的多蛋白復合體，由NOD樣受體NLRP3、接頭分子ASC及效應分子procaspase-1組成，NLRP3炎性體激活后促進caspase-1的活化及IL-1β和IL-18的分泌，參與人體的炎癥和免疫反應。既往研究顯示NLRP3炎性體的激活與急性肝損傷有密切關系，但其在肝衰竭發(fā)病機制中的作用尚不清楚。
　　目的:通過觀察HBV

2、相關慢加急性肝衰竭患者(HBV-ACLF)外周血及D-氨基半乳糖和脂多糖(GalN/LPS)誘導的急性肝衰竭小鼠肝組織中NLRP3爽性體通路及CD40-CD40L相關分子的表達水平，了解NLRP3炎性體在肝衰竭發(fā)病中的表達特點，明確NLRP3炎性體表達水平與肝衰竭患者預后的相關性，并初步探討CD40-CD40L調(diào)控NLRP3炎性體激活的可能機制。
　　方法:
　　(1)選取HBV-ACLF患者60例，慢性乙肝患者(CHB)2

3、0例，健康對照(HC)20例，通過熒光定量PCR方法檢測三組人群外周血單個核細胞中NLRP3炎性體分子及proIL-1β的翻譯表達水平并進行比較，通過ELISA方法檢測三組人群血清IL-1β、IL-18分泌水平，了解NLRP3炎性體及其下游細胞因子在慢加急性肝衰竭患者中的表達特點，并將HBV相關慢加急性肝衰竭存活組與未存活組患者NLRP3炎性體表達水平進行比較并與預后分析。同時通過熒光定量PCR、ELISA方法檢測三組人群外周血單個核細

4、胞及血清中CD40-CD40L表達情況，與NLRP3 mRNA進行相關分析，了解兩者有無相關性。
　　(2)通過熒光定量PCR、ELISA、WesternBlot、免疫組化方法檢測GalN/LPS誘導急性肝衰竭小鼠模型過程3h、6h及對照組的血清、肝組織的NLRP3炎性體通路及CD40-CD40L相關分子表達情況，應用Caspase-1活性檢測試劑盒檢測肝組織caspase-1活化情況。
　　結果:
　　(1) HBV

5、-ACLF患者外周血單個核細胞NLRP3 mRNA(63.28±51.38×10-4)、ASC mRNA(395.23±141.15×10-4)、procaspase-1 mRNA(325.64±167.44×10-4)、proIL-1βmRNA（896.80±555.55×10-4）表達明顯高于慢性乙肝患者及健康人，并伴隨血清IL-1β（4.29±2.28 pg/ml）、IL-18(1358.17±421.29 pg/ml)水平的明顯

6、升高;HBV-ACLF患者外周血單個核細胞CD40 mRNA(65.85±46.18×10-4)高表達，CD154 mRNA(17.17±11.18×10-4)低表達;血清sCD154(201.89±114.07pg/ml)表達明顯升高，血清sCD40(48.28±16.31pg/ml)水平較HC組(31.28±12.45pg/ml)升高，卻明顯低于CHB組（78.23±19.25 pg/ml）; NLRP3mRNA與CD40 mRNA

7、顯著正相關，HBV-ACLF未存活組患者外周血單個核細胞NLRP3 mRNA表達水平高于存活組，NLRP3表達水平與MELD評分相關，NLRP3曲線下面積0.709(95％ CI0.575-0.843)。
　　(2)GalN/LPS誘導急性肝衰竭小鼠模型過程中造模6H組小鼠肝組織NLRP3 mRNA(5.71±1.38)、ASC rmRNA(3.03±1.15)、procaspase-1 mRNA(19.75±7.44)、proI

8、L-1βmRNA(16.80±5.55)、proIL-18 mRNA(0.76±0.34)、NF-κBmRNA(2.98±2.44)、CD40 mRNA（35.85±6.18）、CD154mRNA(2.16±0.72)表達水平明顯高于造模3H組，并伴隨caspase-1活化增加及血清IL-1β（468.29±146.28 pg/ml）、IL-18(11.01±4.79pg/ml)分泌水平明顯升高;Western Blot結果顯示隨著小鼠

9、急性肝衰竭的發(fā)生發(fā)展NLRP3、caspase-1、IL-1β及CD40、CD40L蛋白表達水平逐漸升高;肝組織免疫組化顯示NLRP3蛋白主要表達在肝細胞胞漿及肝竇內(nèi)皮細胞中，造模6H組（肝衰竭小鼠）肝組織中NLRP3表達最強。
　　結論:NLRP3炎性體的激活在HBV相關慢加急性肝衰竭及GalN/LPS誘導小鼠急性肝衰竭發(fā)病中起重要作用。NLRP3炎性體與病情嚴重程度相關，對慢加急性肝衰竭預后有一定預測作用。CD40 mRNA的