HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者維生素D及其愛(ài)華變化的意義.pdf

1、目的:乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）相關(guān)慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是在慢性乙型肝炎基礎(chǔ)上發(fā)生的嚴(yán)重肝功能損害，出現(xiàn)以黃疸、肝性腦病和腹水等為主要表現(xiàn)的臨床綜合征，其發(fā)病急，病情兇險(xiǎn)，病死率高且治療方法有限。目前關(guān)于肝衰竭的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確。大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為肝衰竭主要是由免疫損傷、缺血缺氧、內(nèi)毒素血癥三重致死性打擊的結(jié)果。肝衰竭時(shí)，肝臟功能發(fā)生嚴(yán)重

2、障礙，肝臟本身合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等發(fā)生嚴(yán)重障礙。維生素D是固醇衍生物，活性維生素D主要在肝臟合成。游離的活性維生素D進(jìn)入細(xì)胞后能迅速與維生素D受體(Vitamin D Receptor，VDR)結(jié)合，發(fā)揮其生物活性。維生素D主要參與鈣磷代謝，近年研究發(fā)現(xiàn)維生素D影響細(xì)胞的增殖與分化，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗纖維化等作用，因此發(fā)揮抑制肝臟腫瘤細(xì)胞增殖、抗肝硬化等作用。但目前維生素D與HBV相關(guān)肝功能衰竭之間的關(guān)系還未闡明。本研究通過(guò)

3、檢測(cè)HBV相關(guān)ACLF、慢性乙型病毒性肝炎（chronic hepatitis B，CHB）血清維生素D水平，同時(shí)比較兩組患者肝組織中VDR的表達(dá)，初步探討維生素D在HBV相關(guān)ACLF中的作用。
　　方法:收集2013年3月至2014年11月于河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院住院患者，共70例，其中CHB患者29例(CHB組)、HBV相關(guān)ACLF患者21例(ACLF組)及選取同期河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院健康體檢者20例（健康對(duì)照組）。并收集行肝移

4、植的ACLF患者13例、肝穿刺活檢的CHB患者肝組織16例及健康供體肝組織4例。 CHB和HBV相關(guān)ACLF的診斷分別符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì)及肝病學(xué)分會(huì)聯(lián)合制定的2010年版《慢性乙型肝炎防治指南》和2012年版《肝衰竭診療指南》中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。分別檢測(cè)個(gè)樣本生化學(xué)指標(biāo)、凝血功能及HBV DNA載量，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清維生素D的水平，使用熒光定量PCR檢測(cè)各樣本肝組織中的VDR mRNA，應(yīng)用免疫組織化學(xué)的染色方法檢測(cè)肝組織內(nèi)VD

5、R蛋白的表達(dá)部位，western blot檢測(cè)VDR蛋白的表達(dá)。比較血清VDR水平在各組之間的差異。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。數(shù)據(jù)分析前進(jìn)行正態(tài)性及方差齊性檢驗(yàn)。滿足正態(tài)且方差齊時(shí)，采用單因素方差分析，組間比較采用Student-Newman-Keuls法。非正態(tài)或方差不齊時(shí)，采用Kruskal-WallisH秩和檢驗(yàn)，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采

6、用Pearson直線相關(guān)分析法。P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、ACLF組、CHB組及健康對(duì)照組人口學(xué)及實(shí)驗(yàn)室檢查特點(diǎn)
　　各組患者的性別和年齡構(gòu)成比均衡可比。ACLF組患者血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase，AST)、總膽紅素(total bilirubin，TBIL)、直接膽紅

7、素(direct bilirubin，DBIL)水平明顯高于CHB組及健康對(duì)照組（P均＜0.01）ACLF組患者血清白蛋白（albumin，Alb）、凝血酶原活動(dòng)度（prothrombin activity，PTA）則明顯低于正常對(duì)照組，ACLF組和CHB組HBV DNA載量無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　2、ACLF組、CHB組患者血清中25-(OH) VD3水平
　　21例ACLF患者、29例CHB患者及20例健康對(duì)照

8、者接受血清25-(OH) VD3水平檢測(cè)。ELISA檢測(cè)示:ACLF組血清VD3水平(42.27±18.43ng/ml)、CHB組（47.63±16.18ng/ml）均低于正常對(duì)照組(94.43±28.17ng/ml)，且ACLF組明顯低于CHB組，差異均具有統(tǒng)計(jì)25-(OH)VD3學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3、ACLF組、CHB組患者肝組織中VDR蛋白表達(dá)
　　13例ACLF患者、16例CHB患者及4例健康對(duì)照者接受肝

9、臟VDR蛋白檢測(cè)。免疫組化檢測(cè)示:VDR廣泛表達(dá)于肝細(xì)胞及肝臟炎癥細(xì)胞。WB檢測(cè)示:ACLF組VDR蛋白表達(dá)（1.336±0.115）明顯高于CHB組（1.071±0.079）及正常對(duì)照組（0.830±0.112），且CHB組明顯高于正常對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。RT-PCR檢測(cè)示:ACLF組VDR mRNA表達(dá)（2.65±0.32）明顯高于CHB組(1.20±0.39)及健康對(duì)照組（0.93±0.07），差異均具有

10、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。同時(shí)，CHB組與健康對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.01）。
　　4、ACLF組、CHB組患者血清25-(OH) VD3水平與HBV DNA的相關(guān)性
　　ACLF組患者血清VD3不足（＜29ng/m1）的發(fā)生率明顯高于CHB組（38.09％vs.6.8％，P＜0.01）。ACLF組患者血清VD水平與HBV DNA載量（r=-0.21，P=0.32）無(wú)相關(guān)性，CHB組患者血清VD水平與HBV DN