肝臟脂蛋白酯酶LPL在糖脂代謝中的作用研究.pdf

1、隨著社會(huì)的發(fā)展，肥胖、糖尿病、心血管等代謝相關(guān)疾病的發(fā)病率逐年提升。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)代謝性疾病有一種共同的表現(xiàn)即血脂代謝紊亂。而引起血脂代謝紊亂的主要原因是血漿中運(yùn)輸脂類的脂蛋白代謝異常。脂蛋白酯酶（ L ipo prote in lipa se，LP L）是一種限速酶，在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要作用。LP L的主要生理功能是催化富含甘油三酯（ tr iglycer id e， T G)的脂蛋白——乳糜微粒（chylomicron,CM）和極低密度

2、脂蛋白（very low density lipoprotein,VLDL)分解為脂肪酸和單酸甘油酯，為組織的氧化反應(yīng)供能和貯存。由于生理狀態(tài)下，LP L主要在心肌、骨骼肌、脂肪組織等肝外組織中表達(dá)，在肝臟中的表達(dá)量極低，過(guò)去針對(duì)肝外組織LP L的研究居多，目前為止，對(duì)于肝臟LP L的功能了解很少。
　　本課題組根據(jù)Cre/LoxP技術(shù)的原理將LPL LoxP小鼠與受Alb啟動(dòng)子介導(dǎo)、肝臟特異表達(dá)的Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠交配繁殖（

3、 Alb-cre）成功構(gòu)建了LP L肝臟特異性敲除小鼠模型，并對(duì)小鼠模型進(jìn)行相關(guān)脂代謝數(shù)據(jù)變化分析，最終得出結(jié)論，肝臟LP L對(duì)成年小鼠血漿脂質(zhì)代謝的調(diào)控具有重要的意義。
　　第一部分生理狀態(tài)下LPL在肝臟中的表達(dá)情況分析
　　目的：研究正常小鼠肝臟中LP L的表達(dá)情況。
　　方法：選取出生不同時(shí)期的C57BL/6小鼠，提取其肝臟及心肌、骨骼肌、肺、胃、腎臟、小腸、腦組織等肝外組織 RN A，并反轉(zhuǎn)錄成 cDN A，最

4、終通過(guò)Quantitative RT-PCR分析其LPL的mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果：肝臟 LP L的表達(dá)在小鼠出生后的前三周呈上升趨勢(shì)，第三周時(shí)處于最高水平；三周后表達(dá)量迅速下降，六個(gè)月以后維持在較穩(wěn)定的低表達(dá)狀態(tài)。成年小鼠LP L主要在心肌、骨骼肌、腦組織等肝外組織中表達(dá)。
　　討論：成年小鼠肝臟中LP L的表達(dá)量很低。
　　第二部分 LPL基因肝臟特異性敲除小鼠模型的構(gòu)建與鑒定
　　目的：構(gòu)建LP L肝臟

5、特異性敲除小鼠模型，為研究肝臟LP L的功能提供實(shí)驗(yàn)工具。
　　方法：將LPL LoxP工具鼠與受Alb啟動(dòng)子介導(dǎo)、肝臟特異表達(dá)的Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠交配繁殖（ Alb-C re），提取后代小鼠鼠尾基因組DN A后，用P CR的方法對(duì)其基因型進(jìn)行鑒定，基因型為 F/F/Cre的為所需小鼠模型。并用Quantitative RT-PCR鑒定模型是否構(gòu)建成功。
　　結(jié)果：本課題組成功構(gòu)建了敲除率達(dá)90％的LP L肝細(xì)胞特異性敲

6、除小鼠模型。
　　討論：小鼠模型的成功為接下去的實(shí)驗(yàn)研究提供了理想的實(shí)驗(yàn)工具。
　　第三部分肝臟LPL缺失，小鼠糖脂代謝指標(biāo)的變化及其意義
　　目的：通過(guò)對(duì)LP L肝臟特異性敲除小鼠模型進(jìn)行糖脂代謝有關(guān)實(shí)驗(yàn)，分析肝臟LP L在糖脂代謝中的作用。
　　方法：肝臟LP L對(duì)脂代謝影響的研究中，對(duì)肝臟LP L基因敲除小鼠及高脂喂養(yǎng)小鼠血漿 LPL蛋白的表達(dá)及其活性進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定兩者血清中 TG、TC、FFA含量、餐后

7、T G清除能力、P407脂質(zhì)分泌實(shí)驗(yàn)。糖代謝研究中，測(cè)定肝臟LP L敲除小鼠的空腹及隨機(jī)血糖、胰島素、葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)、胰島素耐量實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：肝臟LP L的缺失會(huì)引起血漿LP L含量及活性的明顯降低。餐后T G清除能力下降，血中T G、T C的含量升高，F(xiàn)FA含量下降。肝臟T G、T C水平不受影響。對(duì)腺病毒誘導(dǎo)的成年 LP L肝臟中敲除小鼠進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Cre-Lo xp構(gòu)建的小鼠模型一致。高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖LP L肝