Prohibitin在人成骨肉瘤MG-63細胞凋亡過程中的變化及其調(diào)控作用研究.pdf

1、本論文以姜黃素誘導人成骨肉瘤MG-63細胞凋亡，運用亞細胞蛋白質(zhì)組學技術(shù)對MG-63細胞凋亡前后核基質(zhì)蛋白的組成變化進行系統(tǒng)分析，發(fā)現(xiàn)細胞凋亡過程中的特異核基質(zhì)蛋白Prohibitin表達下調(diào)。生物信息學初步分析顯示差異表達蛋白參與了細胞死亡和存活以及細胞周期等調(diào)控過程，涉及G2/M期DNA損傷檢驗點調(diào)控、Myc介導的細胞凋亡等信號通路，而Prohibitin是其中的關(guān)鍵調(diào)控蛋白。在此基礎(chǔ)上，對Prohibitin在MG-63細胞誘導凋

2、亡前后的表達和定位變化，及其與相關(guān)癌基因、抑癌基因產(chǎn)物的共定位及相互作用關(guān)系進行了研究。蛋白質(zhì)免疫印跡雜交證實在人成骨肉瘤MG-63細胞誘導凋亡后，Prohibitin在核基質(zhì)中的表達下調(diào)。運用免疫細胞化學技術(shù)和激光共聚焦顯微鏡觀察誘導凋亡前后Prohibitin在細胞內(nèi)的定位，結(jié)果顯示Prohibitin在MG-63細胞中與c-Myc、Bax、Fas、Bcl-2、P53和Rb等具有不同程度的共定位關(guān)系，且在姜黃素處理后其共定位區(qū)域發(fā)生

3、了變化。利用原核表達純化GST-PHB融合蛋白和GSTpull-down技術(shù)確證了Prohibitin與Bax、c-Myc和P53有直接的相互作用。進一步通過構(gòu)建真核表達載體pEGFP-C1-phb并轉(zhuǎn)染MG-63細胞，觀察結(jié)果表明Prohibitin在姜黃素誘導凋亡前后發(fā)生了細胞內(nèi)的定位變化。
　　 研究結(jié)果顯示MG-63細胞誘導凋亡前后Prohibitin在核基質(zhì)中的表達發(fā)生了顯著改變，表明Prohibitin在腫瘤細胞誘導

4、凋亡過程中發(fā)揮了重要作用，隨后的實驗確證了Prohibitin亞細胞定位的改變及其與相關(guān)癌基因、抑癌基因產(chǎn)物之間的相互作用關(guān)系，初步揭示了腫瘤細胞誘導凋亡過程中Prohibitin的相互作用網(wǎng)絡(luò)，生物信息學分析從較為整體的水平闡釋了其在凋亡過程中的分子調(diào)控機制。由此提示了Prohibitin生物功能的發(fā)揮可能受其亞細胞定位及其與相關(guān)蛋白的相互作用的影響，這為更深入研究Prohibitin的生物功能指明了方向，而對Prohibitin在細