山西省非綜合征型耳聾基因的突變分析以及新突變功能預測.pdf

1、背景：耳聾是最常見的感覺系統(tǒng)缺陷性疾病之一，多為遺傳因素所致，其遺傳異質(zhì)性高，至今與其相關的耳聾基因有兩百多個。按遺傳性耳聾表型不同，可將其化分兩類，一類為綜合征型耳聾（SHL），即除聽力下降外還伴有其他系統(tǒng)的臨床癥狀；另一類是非綜合征型耳聾（NSHL），即除聽力下降外無其他臨床癥狀，其中在遺傳性耳聾中，NSHL占70％以上?，F(xiàn)在許多研究表明耳聾主要與4個基因（GJB2、GJB3、SLC26A4、mtDNA）相關，臨床上的耳聾基因診斷也

2、是針對這4個基因的熱點突變進行檢測，然而有相當一部分的NSHL患者并未找到這些熱點突變，因而得不到早期診斷，所以如何提高耳聾基因診斷率，成為難題也成為熱點。
　　目的：本課題將基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術、高通量基因捕獲技術、Sanger測序三種方法相結合，統(tǒng)計山西地區(qū)NSHL常見基因熱點突變，尋找新的具有山西特色的熱點致病突變，從而為耳聾的早期診斷和治療提供依據(jù)。
　　方法：由山西省太原市中心醫(yī)院收集山西省各地區(qū)聾

3、啞學校NSHL患者300例，首先利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜法篩查300例標本4個常見致病基因20個熱點突變位點，統(tǒng)計其各個位點的突變率；其次利用高通量基因捕獲技術檢測在20個位點未發(fā)現(xiàn)突變的患者中選取的20例標本，統(tǒng)計熱點突變位點，針對新熱點突變，利用在線功能預測軟件預測其對蛋白功能的破壞性；最后利用Sanger測序檢測剩余標本中經(jīng)高通量基因捕獲技術篩選出的熱點突變，統(tǒng)計其在散發(fā)人群中的突變率，從而驗證篩選出的突變是否為山西N

4、SHL患者的熱點突變（針對新發(fā)現(xiàn)的突變，以200例健康人標本作為對照）。
　　結果：
　　1.基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜法檢測300例標本后，152例發(fā)生突變，其中GJB3基因未發(fā)現(xiàn)突變。
　　2.在剩余的148例標本中選取20例，經(jīng)過高通量基因捕獲技術檢測后，發(fā)現(xiàn)三個熱點突變：SLC26A4基因c.1334T>G( p.L445W)突變、WFS1基因c.2596G>A( p.D866N)突變、MYO7A基因 c

5、.5662C>T( p.H1888Y)突變，其中 c.1334T>G( p.L445W)、c.2596 G>A( p.D866N)是已被報道過的致病突變；另一個是首次發(fā)現(xiàn)的可疑致病性突變。
　　3.通過對剩余的128例標本針對上述三個熱點突變進行Sanger測序驗證后，有3例發(fā)生c.2596 G>A( p.D866N)，未發(fā)現(xiàn)c.1334T>G( p.L445W)和c.5662C>T(p.H1888Y)突變，正常對照組也未發(fā)現(xiàn)c.

6、5662C>T( p.H1888Y)突變，此突變致病性有待進一步研究。
　　結論：
　　1.山西省遺傳性耳聾的主要致病基因為GJB2、SLC26A4、mtDNA，但各個突變位點攜帶率與其他地區(qū)差別明顯；c.235delC和c.299-300delAT突變是GJB2基因的熱點突變位點， IVS7-2A>G和c.2168A>G突變是SLC26A4基因的熱點突變位點， c.1555A>G突變是線粒體12S rRNA基因的熱點突變位