超濾離心質(zhì)譜法篩選中藥中的酶抑制劑.pdf

1、酪氨酸酶(tyrosinase，ECl.14.18.1，簡稱TYR)也稱多酚氧化酶，是一種多功能的含銅氧化酶。酪氨酸酶是生物體合成黑色素的關(guān)鍵酶，酪氨酸酶的過量表達(dá)可導(dǎo)致人體色素沉著性疾病的產(chǎn)生。酪氨酸酶抑制劑能夠抑制酪氨酸酶的活性，能夠有效的預(yù)防和治療色素沉著性疾病。曲酸、氫醌和熊果苷等酪氨酸酶抑制劑在化妝品等行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用。但是目前的酪氨酸酶抑制劑均有不同的副作用，因此，尋找更有效的酪氨酸酶抑制劑已經(jīng)成為人們研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。本文

2、選擇葛根和白附子為研究目標(biāo)，分析并鑒定這兩味中藥中抑制酪氨酸酶的活性單體，以期發(fā)現(xiàn)療效好，副作用小的酪氨酸酶抑制劑。
　　胰脂肪酶(Pancrelipase，EC31.1.3)是分解脂肪的酶，是機(jī)體吸收脂肪的關(guān)鍵酶。胰脂肪酶在動(dòng)植物體和微生物中普遍存在，它參與了脂肪消化、吸收、利用的全過程。胰脂肪酶抑制劑是減少人體對外源性脂肪吸收、消化的最有效途徑之一，在降脂方面展現(xiàn)出廣闊的前景。目前，胰脂肪酶抑制劑奧利司他已經(jīng)成功應(yīng)于臨床治療肥

3、胖，但是長期服用該藥物會(huì)導(dǎo)致過敏、肝毒性和腎毒性等嚴(yán)重的毒副作用。天然產(chǎn)物以其高療效和低毒性的特點(diǎn)成為了人們尋找胰脂肪酶抑制劑的重點(diǎn)領(lǐng)域。本文選擇葛根和荷葉為研究目標(biāo)，分析并鑒定這兩味中藥中抑制胰脂肪酶的活性單體，以期發(fā)現(xiàn)療效好，副作用小的胰脂肪酶抑制劑。
　　本課題采用超濾離心質(zhì)譜分析技術(shù)，結(jié)合體外酶活性實(shí)驗(yàn)方法，對中藥葛根和白附子提取物中的酪氨酸酶抑制劑和中藥葛根和荷葉提取物中的胰脂肪酶抑制劑進(jìn)行了分析和鑒定。首先對酶活實(shí)驗(yàn)的

4、兩個(gè)關(guān)鍵因素孵化時(shí)間和溫度進(jìn)行了篩選，確定最佳孵化時(shí)間為40分鐘、溫度為37℃。通過優(yōu)化的酶活實(shí)驗(yàn)和超濾離心質(zhì)譜技術(shù)從白附子和葛根中分別篩選出5種和7種酪氨酸酶抑制劑；從葛根和荷葉中分別篩選出5種胰脂肪酶抑制劑。通過體外酶活實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了葛根中的葛根素對酪氨酸酶和胰脂肪酶均有抑制作用，進(jìn)一步說明了該方法的可行性。通過分子對接研究了酪氨酸酶與葛根素的結(jié)合方式，結(jié)果表明在葛根素與酪氨酸酶的結(jié)合過程中，氫鍵起到了關(guān)鍵作用。本文建立的超濾離心質(zhì)譜技