基于普朗尼克修飾的樹狀聚合物納米給藥系統(tǒng)的構(gòu)建及其克服腫瘤多藥耐藥的研究.pdf

1、腫瘤多藥耐藥(MDR)是化療失敗的主要原因之一。納米給藥系統(tǒng)因其獨(dú)特的性質(zhì)，為克服MDR提供了一種有效手段。聚酰胺-胺（PAMAM）樹狀大分子具有溶酶體逃逸及細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)功能，可以將DNA毒性藥物進(jìn)一步遞送至細(xì)胞核內(nèi)。但PAMAM的高電荷所引起的細(xì)胞毒性限制了其應(yīng)用。普朗尼克是一種具有克服MDR特性的三嵌段共聚物，采用其對PAMAM進(jìn)行修飾，有利于提高納米給藥系統(tǒng)的安全性和療效。本文首先設(shè)計(jì)了普朗尼克F127(PF127)修飾的PAMAM

2、聚合物，1H-NMR、FTIR及茚三酮實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明PAMAM-PF127成功合成。與PAMAM相比，PAMAM-PF127的zeta電位降低，溶血毒性和細(xì)胞毒性減小。以此載體負(fù)載阿霉素(DOX)，結(jié)果顯示，所制備的DOX/PAMAM-PF127可以增加DOX在MCF-7/ADR細(xì)胞內(nèi)的累積，并將DOX遞送至細(xì)胞核內(nèi)，最終提高M(jìn)CF-7/ADR細(xì)胞的凋亡。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴采用生物相容性更好的普朗尼克F68(PF68)對

3、PAMAM進(jìn)行修飾，考察普朗尼克修飾數(shù)目對載體性能的影響。成功制備了PF68修飾數(shù)目不同的PAMAM-n1 PF68、PAMAM-n2 PF68及PAMAM-n3 PF68三種聚合物（n表示PF68的接枝數(shù)目，分別為31、54及79個(gè)）?？疾炝巳NPAMAM-PF68的載藥能力、載藥復(fù)合物的粒徑及細(xì)胞毒性。結(jié)果表明PF68的修飾數(shù)目越多，抑制MCF-7/ADR細(xì)胞的效果越好。但PF68的過多修飾，亦會降低PAMAM-PF68的載藥能力，

4、并導(dǎo)致載藥復(fù)合物粒徑增大，均一性下降。⑵優(yōu)選DOX/PAMAM-n2 PF68進(jìn)一步考察其克服MDR的機(jī)制及體內(nèi)抗MCF-7/ADR腫瘤的效果。結(jié)果顯示，DOX/PAMAM-n2 PF68內(nèi)吞入胞后，載體的質(zhì)子海綿效應(yīng)可以促進(jìn)其從溶酶體中逃逸。載體進(jìn)一步作用于線粒體，一方面引起ROS水平的升高、線粒體膜電位的降低，從而促進(jìn)凋亡的產(chǎn)生;另一方面降低ATP的水平，進(jìn)而抑制P-gp等藥物外排蛋白的活性。DOX/PAMAM-n2 PF68最終將

5、DOX遞送至細(xì)胞核中，并通過調(diào)節(jié)耐藥相關(guān)基因的表達(dá)，如增加TopoⅡα、降低Bcl-2等的表達(dá)以進(jìn)一步促進(jìn)細(xì)胞凋亡。與游離DOX相比，DOX/PAMAM-n2PF68具有更強(qiáng)的腫瘤球滲透能力，能更好地抑制MCF-7/ADR腫瘤球的生長。體內(nèi)研究表明DOX/PAMAM-n2 PF68能增加藥物在腫瘤部位的累積，顯著抑制MCF-7/ADR腫瘤的生長，并降低DOX的心臟毒性。⑶通過近紅外（NIR）光照控制ROS的產(chǎn)生，進(jìn)而引起雙硒鍵的斷裂，P

6、PF68脫離GO，藥物暴露而迅速釋放。1H-NMR、FTIR結(jié)果表明GO-PPF68成功合成。H2O2處理后，AFM、粒徑及電位結(jié)果表明GO-PPF68具有ROS響應(yīng)性。以此載體共載光敏劑吲哚菁綠(ICG)及化療藥物DOX，構(gòu)建ICG/DOX/GO-PPF68，以實(shí)現(xiàn)可控的化療與光熱治療的協(xié)同治療。體外釋放實(shí)驗(yàn)表明DOX從ICG/DOX/GO-PPF68中的釋放具有pH敏感性、溫度依賴性和氧化敏感性。⑷考察ICG/DOX/GO-PPF6

7、8體內(nèi)外抑制MCF-7/ADR腫瘤的療效。結(jié)果表明，NIR激光照射下，ICG/DOX/GO-PPF68對MCF-7/ADR細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，NIR激光照射后，ICG/DOX/GO-PPF68可以顯著提高M(jìn)CF-7/ADR細(xì)胞對DOX的攝取量及攝取百分?jǐn)?shù)。入胞后，在NIR激光照射下，載體可以成功從溶酶體中逃逸，引起ROS水平快速升高，進(jìn)而促使大量DOX迅速釋放，最終DOX達(dá)到細(xì)胞核。在孵育48 h后，ICG/DOX/G