基質細胞衍生因子-1α 對鈣敏感受體介導的大鼠軸形皮瓣缺血-再灌注損傷的拮抗作用.pdf

1、基于皮瓣移植術后的壞死一直是臨床上的一個難題，而缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion, I/R)損傷是皮瓣術后移植的壞死的主要原因之一?；|細胞衍生因子1（SDF-1α）通過激活SDF-1α/CXCR4生物軸對缺血性皮瓣的血管新生的有重要作用。鈣敏感受體（CaSR）的激活與缺血再灌注損傷（I/R）引起的心肌組織凋亡相關。本實驗主要研究SDF-1α拮抗CaSR活化介導的軸型皮瓣缺血再灌注損傷的可行性。研究內容分為以下三個方

2、面：
　　第一部分構建SD大鼠缺血再灌注模型及篩選合適缺血時間
　　目的：構建一個SD大鼠的缺血再灌注模型，并實驗選擇一個合適的缺血時間。
　　方法：以右側腹部腹壁淺支內側和外側分支供應區(qū)域的軸型皮瓣為模型。12只大鼠隨機分為4組，缺血時間分別為1 h、2 h、3 h、4 h，在再灌注后2 h收集皮瓣組織，WB檢測各組皮瓣組織中CaSR。
　　結果：缺血3 h時皮瓣中CaSR的表達量最高，低于3 h和高于3 h，

3、CaSR的表達量均有所下降。
　　結論：選取3 h作為下一步實驗的缺血時間。
　　第二部分 CaSR、SDF-1α對皮瓣的壞死、細胞凋亡以及血管生成的影響
　　目的：研究CaSR的表達對皮瓣壞死、細胞凋亡和血管生成的影響及SDF-1α對CaSR的拮抗做用。
　　方法：30只大鼠隨機分為5組，分別從股靜脈給予CaCl2（CaSR激動劑），NPS2143（CaSR抑制劑）+CaCl2，SDF-1α（CXCR4激動劑）

4、+CaCl2，AMD3100（CXCR4拮抗劑）+SDF-1α+ CaCl2和生理鹽水，然后進行三小時的缺血。再灌注2小時或7天后，收集皮瓣組織進行檢測。
　　結果：CaCl2組皮瓣具有較高的壞死率、較高細胞凋亡率和較低的血管生成率。而NPS2143+CaCl2組對以上結果有明顯的抑制作用。SDF-1α+ CaCl2組片皮瓣壞死率和細胞凋亡率減少，血管生成率增加。
　　結論：CaSR與皮瓣的缺血再灌注損傷密切相關，而SDF-

5、1α同樣對CaSR的損傷作用有一定的拮抗作用。
　　第三部分 PCR、WB、IHC檢測皮瓣的壞死與成活機制
　　目的：應用PCR、WB、IHC方法檢測皮瓣中CaSR、CXCR4表達變化及對凋亡相關基因和蛋白表達的影響。
　　方法：對第二部分收集的皮瓣組織，采用免疫組織化學、免疫印跡、實時定量PCR檢測。
　　結果：CaSR高表達促凋亡蛋白(FSA、Cyt-c、Cleaved Casepase-3、Casepase

6、-9、Bax)高表達及抗凋亡蛋白(Bcl-2)微表達。而NPS2143+CaCl2組的結果完全相反，即CaSR低表達，促凋亡蛋白表達減弱而抗凋亡蛋白表達增加。SDF-1α/CXCR4生物軸激活與NPS2143有相同的作用，即Caspase-3/9、FAS、Cyt-c、Bax表達降低和Bcl-2蛋白增加。
　　結論：SDF-1α/CXCR4軸的激活可以通過抑制皮瓣的細胞凋亡和增強皮瓣的血管新生微血來減輕CaSR介導的缺血再灌注損傷。