基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α 對鈣敏感受體介導(dǎo)的大鼠軸形皮瓣缺血-再灌注損傷的拮抗作用.pdf

1、基于皮瓣移植術(shù)后的壞死一直是臨床上的一個難題，而缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion, I/R)損傷是皮瓣術(shù)后移植的壞死的主要原因之一?；|(zhì)細(xì)胞衍生因子1（SDF-1α）通過激活SDF-1α/CXCR4生物軸對缺血性皮瓣的血管新生的有重要作用。鈣敏感受體（CaSR）的激活與缺血再灌注損傷（I/R）引起的心肌組織凋亡相關(guān)。本實驗主要研究SDF-1α拮抗CaSR活化介導(dǎo)的軸型皮瓣缺血再灌注損傷的可行性。研究內(nèi)容分為以下三個方

2、面：
　　第一部分構(gòu)建SD大鼠缺血再灌注模型及篩選合適缺血時間
　　目的：構(gòu)建一個SD大鼠的缺血再灌注模型，并實驗選擇一個合適的缺血時間。
　　方法：以右側(cè)腹部腹壁淺支內(nèi)側(cè)和外側(cè)分支供應(yīng)區(qū)域的軸型皮瓣為模型。12只大鼠隨機(jī)分為4組，缺血時間分別為1 h、2 h、3 h、4 h，在再灌注后2 h收集皮瓣組織，WB檢測各組皮瓣組織中CaSR。
　　結(jié)果：缺血3 h時皮瓣中CaSR的表達(dá)量最高，低于3 h和高于3 h，

3、CaSR的表達(dá)量均有所下降。
　　結(jié)論：選取3 h作為下一步實驗的缺血時間。
　　第二部分 CaSR、SDF-1α對皮瓣的壞死、細(xì)胞凋亡以及血管生成的影響
　　目的：研究CaSR的表達(dá)對皮瓣壞死、細(xì)胞凋亡和血管生成的影響及SDF-1α對CaSR的拮抗做用。
　　方法：30只大鼠隨機(jī)分為5組，分別從股靜脈給予CaCl2（CaSR激動劑），NPS2143（CaSR抑制劑）+CaCl2，SDF-1α（CXCR4激動劑）

4、+CaCl2，AMD3100（CXCR4拮抗劑）+SDF-1α+ CaCl2和生理鹽水，然后進(jìn)行三小時的缺血。再灌注2小時或7天后，收集皮瓣組織進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：CaCl2組皮瓣具有較高的壞死率、較高細(xì)胞凋亡率和較低的血管生成率。而NPS2143+CaCl2組對以上結(jié)果有明顯的抑制作用。SDF-1α+ CaCl2組片皮瓣壞死率和細(xì)胞凋亡率減少，血管生成率增加。
　　結(jié)論：CaSR與皮瓣的缺血再灌注損傷密切相關(guān)，而SDF-

5、1α同樣對CaSR的損傷作用有一定的拮抗作用。
　　第三部分 PCR、WB、IHC檢測皮瓣的壞死與成活機(jī)制
　　目的：應(yīng)用PCR、WB、IHC方法檢測皮瓣中CaSR、CXCR4表達(dá)變化及對凋亡相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：對第二部分收集的皮瓣組織，采用免疫組織化學(xué)、免疫印跡、實時定量PCR檢測。
　　結(jié)果：CaSR高表達(dá)促凋亡蛋白(FSA、Cyt-c、Cleaved Casepase-3、Casepase

6、-9、Bax)高表達(dá)及抗凋亡蛋白(Bcl-2)微表達(dá)。而NPS2143+CaCl2組的結(jié)果完全相反，即CaSR低表達(dá)，促凋亡蛋白表達(dá)減弱而抗凋亡蛋白表達(dá)增加。SDF-1α/CXCR4生物軸激活與NPS2143有相同的作用，即Caspase-3/9、FAS、Cyt-c、Bax表達(dá)降低和Bcl-2蛋白增加。
　　結(jié)論：SDF-1α/CXCR4軸的激活可以通過抑制皮瓣的細(xì)胞凋亡和增強(qiáng)皮瓣的血管新生微血來減輕CaSR介導(dǎo)的缺血再灌注損傷。