AMD3100抑制CXCR4-β-catenin信號(hào)通路抑制神經(jīng)干細(xì)胞遷移分化的體外研究.pdf

1、目的：
　　探討AMD3100通過CXCR4/β-catenin信號(hào)通路對(duì)中樞性神經(jīng)干細(xì)胞增殖、遷移和分化的抑制作用。
　　方法：
　　1、懸浮法培養(yǎng)中樞神經(jīng)干細(xì)胞，配制含AMD3100不同濃度梯度（0ug/L，40ug/L,80ug/L,160ug/L,320ug/L,640ug/L和1000ug/L）的培養(yǎng)基培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞。分別在2小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)用CCK8法檢測(cè)各濃度梯度OD值，再分別計(jì)算各時(shí)間

2、時(shí)的增殖抑制率。
　　2、根據(jù)前一步AMD3100抑制中樞神經(jīng)干細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最適藥物濃度為80ug/L和最佳作用時(shí)間為48小時(shí)。分別培養(yǎng)對(duì)照組（0ug/L）和AMD3100組（80ug/L）中樞神經(jīng)干細(xì)胞48小時(shí)，劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力的變化，Western Blot檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)志物Nestin、神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)志物β-tubulin、Wnt、β-catenin和β-catenin（P-Tyr489）的表達(dá)情況。

3、　　結(jié)果：
　　1、CCK8法檢測(cè)結(jié)果：各濃度梯度的AMD3100作用于神經(jīng)干細(xì)胞后，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，80ug/L,160ug/L,320ug/L,640ug/L和1000ug/L各濃度下增殖能力逐漸降低，抑制率逐漸增高，在48小時(shí)和72小時(shí)，增殖能力均極顯著低于0ug/L，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），抑制率均達(dá)到50％以上；40ug/L濃度時(shí)增殖能力與0ug/L相比無明顯差異（P＞0.05）。在2小時(shí)和24小時(shí)，隨著濃度

4、的增加各濃度梯度抑制率逐漸增加；在48小時(shí)和72小時(shí)160ug/L,320ug/L和640ug/L抑制率呈增加趨勢(shì)，均低于80ug/L和1000ug/L，均高于24小時(shí)各濃度梯度抑制率。
　　2、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果：在48小時(shí)AMD3100組細(xì)胞遷移面積百分比為(19.80%±1.83)，明顯低于對(duì)照組（32.92%±2.64），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western Blot檢測(cè)48小時(shí)AMD3100組Nestin、β-t

5、ubulin、β-catenin和β-catenin（P-Tyr489）的表達(dá)量均低于與對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組Wnt的表達(dá)量無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、AMD3100抑制中樞神經(jīng)干細(xì)胞的增殖具有時(shí)間和濃度依賴性。
　　2、AMD3100抑制SDF-1/CXCR4軸可以抑制中樞神經(jīng)干細(xì)胞的遷移和分化能力。
　　3、AMD3100可能是通過CXCR4/β-catenin