EPO-EPOR信號(hào)通路對(duì)成體脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分化作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　取成年SD大鼠脊髓細(xì)胞，原代培養(yǎng)后取第3代NSCs做為研究對(duì)象，在體外條件下加入重組人促紅細(xì)胞生成素（rhEPO），研究促紅細(xì)胞生成素（EPO）及其受體（EPOR）信號(hào)通路對(duì)大鼠成體脊髓神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）分化的影響。
　　方法：
　?、賹?shí)驗(yàn)對(duì)象：取成年SD大鼠脊髓細(xì)胞，在培養(yǎng)基DMEM/F12中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至第3代NSCs，選取其做為研究對(duì)象；
　?、趯?duì)培養(yǎng)的成體脊髓NSCs進(jìn)行BrdU與Nes

2、tin的雙標(biāo)記染色，以對(duì)NSCs進(jìn)行鑒定；
　?、蹖?shí)驗(yàn)分組：分為兩組，在實(shí)驗(yàn)組的培養(yǎng)液中再加入重組人促紅細(xì)胞生成素（rhEPO），同時(shí)在培養(yǎng)液中滴加等體積生理鹽水作為對(duì)照組；
　?、懿捎妹庖邿晒馊旧椒▽?duì)各組NSCs上EPOR蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)；
　?、菔褂肳estern Blot法對(duì)各組NSCs上EPOR蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)；
　?、薏捎妹庖呒?xì)胞化學(xué)法分別觀測(cè)兩分組的NSCs的分化現(xiàn)象。
　　結(jié)果：

3、r>　?、倥囵B(yǎng)7d后，在鏡下可見(jiàn)圓形的神經(jīng)球形態(tài)，經(jīng)形態(tài)學(xué)及免疫化學(xué)鑒定，鑒定其為成體NSCs；
　　②培養(yǎng)的成體NSCs在體外可分化為神經(jīng)元及星型膠質(zhì)細(xì)胞；
　?、勖庖邿晒馊旧Y(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組NSCs中均有EPOR蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組增強(qiáng)；
　?、艿鞍酌庖哂≯E結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組EPOR蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；
　　⑤免疫熒光染色法觀測(cè)到實(shí)驗(yàn)組NSCs分化為神經(jīng)元的比例高