EPO-EPOR信號通路對成體脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分化作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　取成年SD大鼠脊髓細(xì)胞，原代培養(yǎng)后取第3代NSCs做為研究對象，在體外條件下加入重組人促紅細(xì)胞生成素（rhEPO），研究促紅細(xì)胞生成素（EPO）及其受體（EPOR）信號通路對大鼠成體脊髓神經(jīng)干細(xì)胞（NSCs）分化的影響。
　　方法：
　?、賹嶒瀸ο螅喝〕赡闟D大鼠脊髓細(xì)胞，在培養(yǎng)基DMEM/F12中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)至第3代NSCs，選取其做為研究對象；
　　②對培養(yǎng)的成體脊髓NSCs進行BrdU與Nes

2、tin的雙標(biāo)記染色，以對NSCs進行鑒定；
　　③實驗分組：分為兩組，在實驗組的培養(yǎng)液中再加入重組人促紅細(xì)胞生成素（rhEPO），同時在培養(yǎng)液中滴加等體積生理鹽水作為對照組；
　?、懿捎妹庖邿晒馊旧椒▽Ω鹘MNSCs上EPOR蛋白表達情況進行檢測；
　?、菔褂肳estern Blot法對各組NSCs上EPOR蛋白表達情況進行檢測；
　　⑥采用免疫細(xì)胞化學(xué)法分別觀測兩分組的NSCs的分化現(xiàn)象。
　　結(jié)果：

3、r>　?、倥囵B(yǎng)7d后，在鏡下可見圓形的神經(jīng)球形態(tài)，經(jīng)形態(tài)學(xué)及免疫化學(xué)鑒定，鑒定其為成體NSCs；
　　②培養(yǎng)的成體NSCs在體外可分化為神經(jīng)元及星型膠質(zhì)細(xì)胞；
　?、勖庖邿晒馊旧Y(jié)果顯示實驗組與對照組NSCs中均有EPOR蛋白表達，實驗組較對照組增強；
　?、艿鞍酌庖哂≯E結(jié)果顯示實驗組EPOR蛋白表達水平較對照組增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；
　　⑤免疫熒光染色法觀測到實驗組NSCs分化為神經(jīng)元的比例高