白英水提取液誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡機(jī)制研究.pdf

1、白英(So1anum Lyratum Thunb SLT)作為我國(guó)傳統(tǒng)中草藥已有2000多 年歷史，以全草及根入藥有清熱利濕、解毒消腫、抗癌等功效，臨床常用于治 療各種癌癥，尤其對(duì)胃癌、肺癌、肝癌、大腸癌、宮頸癌、腦腫瘤、鼻咽癌‘聲帶癌等有一定療效。迄今為止，白英的抗癌活性成分及其機(jī)制尚未完全明確。關(guān)于白英誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞增殖的研究，國(guó)內(nèi)外報(bào)道較少，而白英作為單味藥誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的研究目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)探

2、討白 英水提取液對(duì)胃癌SGC一7901細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)和誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡及其 分子機(jī)制，為白英用于臨床治療胃癌提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。　　方法 1.取白英全草干品按常規(guī)煎熬獲取白英水提取液。 2.體外培養(yǎng)人胃癌SGC-7901細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為正常對(duì)照組、白英處理組(濃 度分別為12.5、25、50mg／m1)和順鉑(25 nlg／L)組。 3.繪制胃癌SGC-790l細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(MTT法)。

3、 4.白英分別處理24h、48h、72h和96h后，采用細(xì)胞毒(MTT法)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胃 癌細(xì)胞抑制率和IC<,50>值。 5.藥物處理48h后，用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。 6.藥物處理48h后，HE染色普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化。 7.藥物處理48h后，DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察DNA條帶(DNA Ladder)。 8.藥物處理48h后，半定量RT-PCR測(cè)定基因bcl-x1、bi

4、d、caspase-9、 caspase-3的表達(dá)變化。 結(jié)果 1.SGC-7901細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期出現(xiàn)在細(xì)胞接種后的第2-6天。 2.SLT水提取液對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用，且這種作用呈一定的劑量和時(shí)間依賴(lài)性。12.5、25、50mg/ml SLT和25mg/L DDP處理SGC-7901細(xì)胞24h，細(xì)胞抑制率分別為(17.317±1.177)％、(35.701±1.693)％、(5

5、1.987±1.157)％和(75.847±0.234)％，處理48h，細(xì)胞抑制率分別為(28.569±1.324)％、(46.632±1.388)％、(60.371±O.281)％和(84.186±0.595)％處理72h，細(xì)胞抑制率分別為(38.146±0.765)％、(57.685±0.265)％、(71.891±O.448)％和(91.538±0.167)％，處理96h，細(xì)胞抑制率分別為(49.537±1.227)％、(64.5

6、64±1.319)％、(76.556±0.492)％和(96.586±1.028)％，以上各組細(xì)胞抑制率與正常對(duì)照組相比均有顯著差異(p＜0.001)；SLT提取液處理24h、48h、72h和96h的IC<,50>分別為45.05、30.99、19.51和12.65mg/ml。 3.觀察到細(xì)胞凋亡所特有的典型形態(tài)和生化特征。形態(tài)學(xué)觀察可見(jiàn)細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)凝聚、邊集、核斷裂，凋亡小體等特征，DNA瓊脂糖凝膠電泳可見(jiàn)DNA梯狀條帶

7、，而正常對(duì)照組沒(méi)有出現(xiàn)上述特征。 4.半定量RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，bcl-xl mRNA表達(dá)下調(diào)而bid、caspase-9和caspase-3 mRNA表達(dá)上調(diào)。12.5、25、50 mg/ml SLT處理組bcl-xl/GAPDH光密度積分值之比分別為0.418±0.042、0.209±0.045、0.127±0.034與正常對(duì)照組0.616±0.021相比有非常顯著差異(p<0.001)；bid/GAPDH光密度積分值

8、之比分別為0.323±0.043、0.53±0.044、0.715±0.037與正常對(duì)照組，O.213±0.021相比有顯著差異(p<0.01或P<0.001)；caspase-9/GAPDH光密度積分值之比分別為0.43±0.021、0.524±0.014、0.714±0.018與正常對(duì)照組0.197±0.028相比有顯著差異(p<0.001)。caspase-3／GAPDH光密度積分值之比分別為0.307±0.022、0.515±0

9、.023、0.606±0.028與正常對(duì)照組0.212±0.013相比有顯著差異(p<0.001)。 結(jié)論 1.SLT水提取液對(duì)人胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖有較強(qiáng)的抑制作用，且這種作用旱一定的劑量和時(shí)間依賴(lài)性。 2．SLT水提取液具有誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡作用，細(xì)胞凋亡率呈一定的時(shí)間—?jiǎng)┝恳蕾?lài)性。細(xì)胞凋亡可能是SLT抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖的機(jī)制之一。 3．SLT水提取液能下調(diào)bcl-x1