XAF-1與TNF-α共表達(dá)腺病毒抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用研究.pdf

1、目的：本研究探討共表達(dá)XAF-1和TFN-α對(duì)HCC細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，并分析其分子機(jī)制。
　　方法：在本研究中，檢測(cè)了肝細(xì)胞癌癌組織樣本中XAF-1的mRNA和蛋白水平，并在肝癌細(xì)胞系中證實(shí)了共表達(dá)XAF-1和TFN-α的腺病毒對(duì)肝癌細(xì)胞的顯著的抑制作用。建立HepG2 M人肝細(xì)胞癌97H細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，并運(yùn)用重組共表達(dá)XAF-1和TNF-α腺病毒及Ad-con對(duì)裸鼠移植瘤模型進(jìn)行瘤內(nèi)注射，對(duì)照組每次注射同等體積的生理鹽水作為對(duì)

2、照。觀察裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)情況，并通過(guò)比較腫瘤體積的變化和對(duì)腫瘤的抑制率來(lái)評(píng)價(jià)其體內(nèi)治療的效果。
　　結(jié)果：肝細(xì)胞癌癌組織樣本中 XAF-1的表達(dá)量明顯低于肝細(xì)胞癌瘤旁樣本，說(shuō)明其降低與腫瘤惡性程度相關(guān)。同時(shí)也在肝細(xì)胞癌細(xì)胞系，如MHCC97L, HepG2和 MHCC97H中證實(shí)了XAF-1表達(dá)量的降低。本研究用一段2A肽編碼序列，構(gòu)建重組的腺病毒Ad-XAF-1&TNF-α，有效的共表達(dá)了XAF-1和TFN-α。當(dāng)Ad-XAF-

3、1和TNF-α轉(zhuǎn)染MHCC97L細(xì)胞后，XAF-1和TFN-α的mRNA和蛋白水平明顯升高。此外，確認(rèn)了被Ad-XAF-1&TNF-α轉(zhuǎn)染的MHCC97L細(xì)胞，細(xì)胞增值率明顯低于單獨(dú)用Ad-XAF-1或 Ad-TNF-α病毒感染的細(xì)胞。
　　與PBS對(duì)照組注射的裸小鼠瘤體積相比較，，Ad-XAF-1&TNF-α組及Ad-con組裸小鼠的瘤體積增長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；Ad-XAF-1&TNF-α治療組裸小鼠瘤體積增長(zhǎng)

4、最為緩慢，與Ad-con組裸小鼠的瘤體積相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Ad-XAF-1&TNF-α注射后的第7天，抑瘤率最高，達(dá)到65.87％，隨后抑瘤率呈下降趨勢(shì)。在注射后第28天，抑瘤率為60.78%.免疫組化染色以及RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與Ad-con組及PBS組裸鼠瘤組織XAF-1、TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)率相比（6.11%±1.73，6.42%±2.59），Ad-XAF-1&TNF-α治療組裸鼠瘤組織XAF-1、T

5、NF-α的陽(yáng)性率表達(dá)增高（16.39%±1.39），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Ad-XAF-1&TNF-α治療組裸鼠瘤組織中 XAF-1、TNF-α基因的 mRNA表達(dá)水平均較Ad-con組、PBS組裸鼠瘤組織中XAF-1、TNF-α基因的mRNA表達(dá)水平增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：Ad-XAF-1&TNF-α共表達(dá)病毒可以較單表達(dá)XAF-1、TNF-α的腺病毒更有效的抑制肝細(xì)胞癌細(xì)胞增殖，介導(dǎo)XA