TNF-α重組溶瘤腺病毒靶向殺傷胃癌細胞的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過研究TNF-α重組溶瘤腺病毒（PPE3-F35-TNF-α）在體外對胃惡性腫瘤細胞存活影響、被感染細胞的死亡方式，并通過對其感染細胞后病毒自身的表達方式來對人類的正常細胞和癌細胞進行相關的研究。
　　方法：
　　首先對TNF-α重組溶瘤腺病毒進行細胞擴增，然后將其分離；對其繁殖能力和滴度進行測試，最后透過顯微鏡觀察分離后的細胞的表達方式。運用MTT對重組后的病毒進行殺傷情況的檢驗，并對其進行凋亡檢測，最

2、后形成一定的表達量，通過對表達量進行數據的統(tǒng)計和分析來達到實驗目的。
　　結果：
　　1、腺病毒體外繁殖能力的測定：通過對溶瘤腺病毒進行感染后，靜置48小時，隨后用顯微鏡觀察其表達形式的變化，可以發(fā)現細胞本身的形態(tài)沒有發(fā)生變化，但是分別感染了兩種病菌的細胞都有了EGFP表達。將細胞進行感染后第八天，對細胞進行取樣再次對其進行感染，發(fā)現感染病毒的細胞仍有EGFP表達。通過上述實驗的測定，我們能夠發(fā)現，SGC-7901l細胞感染

3、的程度受到裂液的不同感染程度也不同，其中受到PPE3-F35-TNF-α的裂解液感染后的病毒滴度要高一些。
　　2、溶瘤病毒對胃癌細胞的體外殺傷作用：通過上述實驗，我們取得了受到不同病毒感染的腫瘤細胞，他們之間的滴度不同。除此之外，也選取沒有受到感染的細胞，同時來進行細胞活力的測定。我們運用MTT法進行測定，發(fā)現PPE3-F35-TNF-α對腫瘤細胞有明顯的殺傷作用。當病毒的濃度較高時，其殺傷的作用也較大。通過對感染天數不同的細胞

4、進行測定，發(fā)現其殺傷的危害隨著時間的長短變化不同而不同，一般是對感染時間較長的細胞的殺傷作用會更大一些。
　　3、凋亡檢測：分別用MOI值為10的PPE3-F35-TNF-α及AD/CMV-EGFP感染SGC-7901細胞48小時后用Annexin-V/PI流式細胞術定量分析進行凋亡檢測，通過實驗我們能夠看到受到感染的細胞的凋亡處理更明顯，細胞計數后的結果顯示：PBS組、AD/CMV-EGFP組、PPE3-F35-TNF-α組的凋

5、亡率為分別為1.44±0.15％、1.75±0.47％、10.75±1.24％(P<0.01)。
　　4、雙抗體夾心法（ELISA）檢測TNF-α的表達量：PPE3-F35-TNF-α感染SGC-7901細胞株后大量表達TNF-α為1463.44±53.47pg/ml；AD/CMV-EGFP組感染后TNF-α的表達量分別為16.06±1.52pg/ml(P<0.05)，對正常細胞均無明顯表達。
　　結論：
　　1、PP