大鼠肝癌演進(jìn)中差異基因的克隆及三種生化因子的研究.pdf

1、目的:以二乙基亞硝胺(N-Nitroso-Diethylamin,DENA)為誘變劑,建立SD大鼠肝癌演進(jìn)中不同時期的動物模型。擴(kuò)增癌變演進(jìn)中差異表達(dá)的未知基因并探索上皮型鈣粘附素(E-cadherin)、組織蛋白酶D(CathespinD)、c-jun三種生化因子的變化規(guī)律。
　　 方法:從灌胃之日起,分別在第2、4、8、11、15、16周分六組處死大鼠,取其肝臟。HE染色制作病理切片觀察肝癌演進(jìn)中肝組織結(jié)構(gòu)變化;cDNA末端

2、快速擴(kuò)增技術(shù)(rapid amplification of cDNA ends,RACE)擴(kuò)增差異表達(dá)基因。免疫組化技術(shù)檢測肝癌演進(jìn)中c-jun含量的動態(tài)變化;免疫印跡技術(shù)檢測肝癌演進(jìn)中E-cadherin、CathespinD、c-jun含量的動態(tài)變化。
　　 結(jié)果:①病理切片:成功獲得大鼠肝輕度變性壞死、重度變性壞死、結(jié)節(jié)性增生、非典型結(jié)節(jié)狀增生、肝癌五個時期的組織材料,病理演變過程和人類肝癌發(fā)生過程相似。②RACE:經(jīng)NC

3、BI數(shù)據(jù)庫分析序列,結(jié)果顯示可能為大鼠凝血因子V的另一種可變剪接的形式。③免疫組化:實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟組織表達(dá)c-Jun陽性細(xì)胞率逐漸增加。第2、4周陽性細(xì)胞率增長較緩,第8周陽性細(xì)胞率有較大幅度的增長,至第16周陽性細(xì)胞率持續(xù)遞增。④免疫印跡:E-cadherin含量總體呈下降趨勢,第2、4、8周無明顯變化,與對照組無顯著性差異:至第11周時顯著下降,第15、16周含量較第11周略有下降,與對照組均呈極顯著性差異(P＜0.01)。Cath

4、espinD含量從第4周開始略有增加,第11周顯著增加,第15、16周與11周含量無明顯變化。從第8周開始與對照組呈顯著差異(P＜0.05),從第11周開始與對照組呈極顯著差異(P＜0.01);c-Jun含量呈逐漸上升趨勢,自第2周開始持續(xù)增加,至16周達(dá)到最高,從8周開始與對照組呈極顯著差異(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:大鼠肝癌演進(jìn)中,凝血因子V的另一種可變剪接形式的發(fā)現(xiàn)及三種生化因子的規(guī)律性變化:E-cadherin含量逐