三種弧菌外膜蛋白K基因的克隆、表達(dá)及其潛在應(yīng)用的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究根據(jù)哈維氏弧菌0mpK基因序列，3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)基因序列和酒精酵母菌表面展示質(zhì)粒載體pYD1上的多克隆位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物，從哈維氏弧菌基因組DNA和質(zhì)粒pET-OmpK-GAPDH中通過PCR技術(shù)擴(kuò)增外膜蛋白基因和融合基因0mpK-GAPDH，把該基因連接到表面展示質(zhì)粒載體pYD1上，轉(zhuǎn)化用于表面展示的酵母EBY100菌株中，以不含載體和含空載體的酵母菌為對(duì)照，加2％(w/v)的半乳糖誘導(dǎo)36 h后，利用免疫熒光法在熒

2、光顯微鏡下檢測到了展示在酵母菌細(xì)胞表面上的外膜蛋白。 同時(shí)利用大腸桿菌表達(dá)載體pQE-30，構(gòu)建了哈維氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻膠弧菌三種弧菌外膜蛋白K的重組大腸桿菌，IPTG誘導(dǎo)4h后能夠在大腸桿菌M15中高效表達(dá)了的融合蛋白。通過誘導(dǎo)表達(dá)用Ni2+親和柱純化了重組的三種弧菌的外膜蛋白K，SDS-PAGE檢測分子量分別為29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈維氏弧菌外膜蛋白k的酵母菌細(xì)胞對(duì)大菱鲆進(jìn)行注射免

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