TCDD-MEHP對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移和侵襲的影響及調(diào)控機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的：
　　乳腺癌是威脅全球女性健康最常見的惡性腫瘤之一，目前已位居我國(guó)女性癌癥發(fā)病之首。轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致90％以上乳腺癌患者死亡的主要原因。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展被認(rèn)為是環(huán)境因素與基因共同作用的結(jié)果，目前研究認(rèn)為，70%~95%的乳腺癌可能歸因于環(huán)境因素和生活習(xí)慣。本文旨在探索典型環(huán)境內(nèi)分泌干擾物2,3,7,8-四氯代二苯并-對(duì)-二噁英（TCDD）與鄰苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）代謝產(chǎn)物鄰苯二甲酸單（2-乙基己）酯（MEHP）單獨(dú)

2、以及共暴露對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移和侵襲的影響，并初步探討其相關(guān)調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　1. TCDD/MEHP對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移和侵襲能力的影響
　　本次研究中毒物暴露計(jì)量分別為1nM、10nM和100nM的 TCDD，和/或100μM MEHP。染毒處理乳腺癌細(xì)胞MCF-724小時(shí)后，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移能力和侵襲性的影響。
　　2. TCDD/MEHP對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF

3、-7遷移和侵襲相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　TCDD/MEHP染毒處理細(xì)胞24小時(shí)后，提取RNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)遷移和侵襲相關(guān)基因MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的mRNA表達(dá)水平。
　　3. TCDD可能通過活化AhR通路誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的遷移和侵襲
　　為研究TCDD誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞遷移和侵襲的過程中是否活化了AhR，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)1nM、10nM和100nM TCDD染毒處理24小時(shí)

4、后AhR和CYP1A1基因的mRNA表達(dá)水平。
　　化學(xué)合成AhR-siRNA和NC-siRNA轉(zhuǎn)染MCF-7乳腺癌細(xì)胞48小時(shí)后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)AhR基因的干擾效率。
　　將siRNA轉(zhuǎn)染MCF-7乳腺癌細(xì)胞48小時(shí)，并且100nM TCDD繼續(xù)染毒處理細(xì)胞24小時(shí)，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移和侵襲能力的改變，并通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的mRNA表

5、達(dá)水平的改變。
　　結(jié)果：
　　1. TCDD/MEHP對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移和侵襲的影響
　　Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，1nM、10nM以及100nM TCDD染毒處理組均促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞 MCF-7的遷移和侵襲能力（P<0.05），并且隨染毒劑量的升高，遷移和侵襲能力增強(qiáng)（P<0.05）。
　　與對(duì)照組相比，100μM MEHP染毒處理組對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的遷移能力和侵襲

6、能力盡管沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但有增加的趨勢(shì)。
　　與對(duì)照組相比，100μM MEHP與100nM TCDD共同染毒處理組增加了乳腺癌細(xì)胞MCF-7的遷移能力和侵襲能力（P<0.05）。100μM MEHP與100nM TCDD共同染毒處理對(duì)乳腺癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力與毒物的單獨(dú)處理效果不同（P<0.05）。
　　2. TCDD/MEHP對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移和侵襲相關(guān)基因表達(dá)的影響
　　實(shí)時(shí)熒光定量PC

7、R結(jié)果顯示，與對(duì)照相比，1nM、10nM以及100nM TCDD處理組MMP2和MMP9基因的mRNA表達(dá)水平升高（P<0.05）。與對(duì)照組相比，100nM TCDD處理組SLUG和VIM基因的mRNA表達(dá)水平升高（P<0.05）。
　　與對(duì)照組相比，100μM MEHP處理組VIM基因的mRNA表達(dá)水平升高（P<0.05），而MMP2、MMP9和SLUG基因的mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但有升高的趨勢(shì)。

8、　　與對(duì)照組相比，100μM MEHP與100nM TCDD共同染毒處理組MMP2、MMP9和VIM基因的mRNA表達(dá)水平升高（P<0.05）。
　　3. TCDD通過活化AhR通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的遷移和侵襲
　　為了研究TCDD誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞遷移和侵襲的過程中是否活化了AhR，實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，1nM、10nM以及100nM TCDD處理組AhR基因的mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>

9、0.05）。但與對(duì)照組相比，1nM、10nM以及100nM TCDD組CYP1A1基因的mRNA表達(dá)水平升高（P<0.05）。
　　siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，AhR基因的mRNA表達(dá)水平降低了74%（ P<0.05）。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示， AhR-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，100nM TCDD對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力降低了（P<0.05）。AhR-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，實(shí)時(shí)熒光定量P

10、CR結(jié)果顯示，100nM TCDD降低了SLUG基因的mRNA表達(dá)水平（P<0.05），而對(duì)MMP2、MMP9和VIM基因的mRNA表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但有降低的趨勢(shì)。
　　結(jié)論：
　　1. TCDD能夠活化AhR通路，并且增加MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的表達(dá)，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的遷移和侵襲。
　　2. TCDD可能通過促進(jìn)MMP2、MMP9、SLUG以及VIM基因的表達(dá)，誘導(dǎo)乳